3色谱仪.ppt

* t（s） 90 120 150 180 1 2 3 4 5 6 标准混合物的优化快速分离谱图 （有效柱长30m，电场强度540V/cm） 1.甲醇 2.苯甲醇 3.二氯苯酚 4.萘酚 5.二苯甲酮 6.苏丹Ⅲ HPCE谱图举例 C * 毛细管电泳仪的组成 1.高压电源 2.毛细管 3.4.缓冲溶液池 5.6.铂电极 7.检测器 1 + - 2 5 6 4 3 7 二、毛细管电泳装置 毛细管电泳仪器组成简单，样品用量少，主要应用在生命科学和药学等研究领域。 记录仪 温控系统 进样口，出样口 * 1.高压电源和铂电极 0-60 kV稳定、连续可调的直流高压电源，随着现代化仪器的不断发展和改进，毛细管电泳装置可实现电压、电流或电功率的梯度控制。 毛细管电泳法中的电极通常以直径0.5-1 mm的铂丝制成。 有些仪器还具有电源极性转换功能。 * 2.毛细管 （1）材料 由于玻璃材料和有机高聚物具有一定的缺点，使用不多。熔融石英材料透光性好，化学惰性、柔韧性好，且强度高、价格便宜，故使用较多。为使其具有弹性，在毛细管柱的外表面涂有聚酰亚胺，以防止毛细管弯曲时断裂。 （2）规格、形状 虽然同样容积的矩形管比圆形管更利于色谱分析，但是加工困难，所以目前仍以圆形毛细管为多。常用内径是20-75μm、外径是350-400μm。 从分离效果和分离时间考虑，在满足分离的前提下尽量用短柱，因为这样可以节省分析时间。一般毛细管不超过1m，对于一定长度的毛细管，有效长度越长越有利于分离。 * 3.进样装置 由于毛细管电泳系统中的分离通道十分细小，所以样品的进样量也就很小，通常为nL级，最大不超过5 nL，这就要求在进样装置中尽可能地避免产生死体积，从而不影响分离效率。 目前，毛细管电泳中采用的进样方法基本都是将毛细管进样端浸入样品池内，然后利用压力、电场力或其它动力驱动样品进入毛细管中以达到进样的目的。进样量可通过改变驱动力的大小或进样时间的长短得到控制。根据驱动力的不同，常用的毛细管电泳进样方式包括电动进样、压力进样和扩散进样。 * 电动进样 当将毛细管的进样端浸入样品池中，在毛细管两端外加直流电压，利用样品中组分的电泳和电渗作用，使其由样品池进入到毛细管内，以达到进样的目的。 电动进样的外加直流电压通常选择在1-10 kV之间，进样时间通常在1-10 s之间。 电动进样具有进样量准确易控的优点； 但对于带不同电荷的离子组分存在进样偏向，带正电荷者由于电泳与电渗方向相同，进样量略多；带负电荷者电泳方向与电渗方向相反，进样量略少。这种现象可使进样具有选择性，对某些样品的分离分析将产生积极作用，但也会对某些样品的定量分析的准确性和可靠性产生一定的影响，不具有通用性。 * 压力进样 当将毛细管的进样端和出样端置于不同压力环境中时，管中的溶液即在压力差的作用下发生流动，从而达到将样品引入的目的。压力差可通过在进样端加压、出样端减压或高度差导致的虹吸作用产生，其值一般选择在3500 Pa以内，进样时间在1-5 s之间。 压力进样法的进样量除了受压力差和进样时间影响外，还受毛细管长度的影响。相同压力差和进样时间下，毛细管越长进样量越小。因此，压力进样法相比电动进样法，进样量的准确性略差。 但是，压力进样时不存在进样偏向的问题，样品中所有组分以及背景溶液都将以同样的流速进入毛细管中，保证了分析的准确性和可靠性，属于通用型方法。 * 扩散进样 当毛细管进样端浸入样品池中时，利用样品组分的浓度扩散作用将样品引入毛细管中，达到进样的目的。扩散进样的时间通常在10-60 s之间。 在电动进样和压力进样中都存在一定程度的扩散进样，因此为避免扩散作用的影响，前两种方法的进样时间都小于扩散进样。 但由于扩散作用受温度、溶液黏度、静电作用等多种因素影响，导致扩散进样的进样量较难准确控制。扩散进样不存在进样偏向，具有通用性。 * 4.缓冲液池 缓冲溶液池内装缓冲溶液，为电泳提供工作介质。要求缓冲溶液池化学惰性，机械稳定性好。 5.填灌与清洗装置 为了填充缓冲溶液以及对毛细管进行清洗，填灌与清洗装置在毛细管电泳仪中有着重要的作用，一般均采用正、负压助推流动的方法，结构与压力进样装置相同，包括位置控制、压力控制和计时控制等部分。为保证助推流动的压力，需要仪器具有较好的密封性。正、负压力通常可采用钢瓶气、空气压缩机、注射器、水泵、蠕动泵等方法产生。 * 6.温度控制系统 由于在电泳过程中会因电流的存在而产生焦耳热效应，因此毛细管内的流动相会在截面方向产生温度梯度，从而导致了分离效率降低、重现性较差等问题。目前商品仪器为避免这种影响，均采用了温度控制系统，使用最为广泛的是风冷和液冷两种方式，其中液冷系统控温效果最好；而风冷系统控温效果较差，但装置简单且价格低廉。 * 7.检测器