[自然科学]第二章生物反应动力学1酶促反应.ppt

第二章 生物反应动力学 第二章 生物反应动力学 第一节 酶促反应动力学 第二节 细胞生长过程动力学 ?本章要求： 掌握简单酶催化反应动力学、有抑制的和复杂的酶催化反应动力学，掌握影响酶催化反应速率的因素，以及动力学参数的求取。 了解微生物反应过程的计量学，掌握分批培养时细胞生长动力学、底物消耗及产物生成动力学，学会细胞反应动力学参数的估算。 第一节 酶促反应动力学 1.1 酶促反应动力学概述 1.2 均相酶促反应动力学 1.3 有抑制的酶催化反应动力学 1.4 影响酶催化反应的因素 酶促反应是生物反应的基础，从酶促反应可获知： （1）酶催化反应机制； ?? （2）对酶促反应速率的规律进行定性或定量的描述，建立可靠的反应动力学方程，从而确定适宜的操作条件。 1.1.1 在生物反应器中使用的催化剂 1.1.4 研究酶促反应的目的 1.2 均相酶促反应动力学 ??均相酶反应：系指酶与反应物系处于同一相—液相的酶催化反应，它不存在相间的物质传递。 ??非均相酶反应：系指酶与反应物系处于不同相的酶催化反应，反应过程存在相间的物质传递。 1.2.1 酶促反应动力学基础 1.2.1 酶促反应动力学基础 根据酶促反应速率与底物浓度之间关系，利用化学反应动力学方法建立相应动力学方程： ??零级反应 ??一级反应 ??二级反应 ??连锁的酶促反应 1.2.1 酶促反应动力学基础 酶促反应与底物浓度无关。 1.2.1 酶促反应动力学基础 4 一级反应 1.2.1 酶促反应动力学基础 5 二级反应 1.2.1 酶促反应动力学基础 6 链锁酶促反应过程 1.2.2 简单的酶催化反应动力学 指由一种反应物（底物）参与的不可逆反应，例如酶催化的水解反应和异构化反应。 可以写为： 由于中间复合物[ES]的浓度C[ES]为一难测定的未知量，因此不能用它来表示最终的速率方程。为此，需用反应体系中的可测量来代替该未知量。这样得到的反应速率方程可以用来描述反应的进程，知道随着反应的进行各组分浓度的变化情况，据此可以设计相关的反应器。 根据假设有： r=rp= k+2C[ES] 根据生成复合物的可逆反应有： 该方程中引入了两个参数： KS=k-1/k+1 ——解离常数 rP,max=k+2CE0 rP,max —— P的最大生成速率,mol/L.s 1.2.4.4 积分法： 1.3 有抑制的酶催化反应动力学 采用稳态法推导动力学方程： 解方程组，得： 可以看出，竞争性抑制动力学的主要特点是米氏常数值的改变，rmax不受竞争性抑制剂的影响。由于有抑制剂的存在，须有较高的基质浓度，才能维持一定的rmax值。 抑制程度取决于CS，CI，Km和Km，当CI增加，或KI减小，都会使Km值增大，使酶与底物的结合能力下降，活性复合物减少，因而使底物反应速率下降。若CI不变，增加CS ，抑制程度降低；若CS不变，增加CI ，抑制程度增加。在一定的CS和CI条件下，KI值越低，抑制程度越大。 例2-6：在一定的酶浓度、pH和温度条件下，没有抑制剂时，酶催化反的反应速率为r0；当抑制剂浓度为5×10-3M时，酶反应速率为rsI，底物浓度与对应的反应结果如下表，求Km、 Km 、rmax值。 解：根据数据作图。 有抑制剂时，抑制作用为竞争性抑制。 非竞争性抑制反应机理 稳态法推导动力学方程： 对非竞争性抑制，由于抑制剂的作用使最大反应速率降低了 倍，并且增加CI、KI减小都使其抑制程度增加。此时rS对CS的关系如图。 以 作图，可得一直线，并 求出Km和 r’max值。 竞争性抑制，随着底物浓度的增大，抑制剂的影响可减弱； 非竞争性抑制，即使增大底物浓度也不能减弱抑制剂的影响。从这个意义上说，竞争性抑制作用是可逆的，非竞争性抑制作用是不可逆的。 反竞争性抑制反应机理 以 rS 对CS作图 据L—B作图法，方程为 以上基本上与非竞争性抑制的模型相同，不同的是，当EI与S结合生成SEI时，由于抑制剂的存在影响了EI与S的结合，因而其解离常数由KS变为 ，同样ES与I结合时，其解离常数由KI变 为 。 例2-7：某酶的Km值为4.7×10-5 mol/L ，如果rmax值为2.2×10-5mol/L·min，在底物浓度为2×10-4mol/L和在（1）竞争性抑制剂与（2）非竞争性抑制剂的浓度均为5×10-4mol/L情况下，其反应速率分别为多大？假定在上述情况下KI值均为3×10-4mol/L，则在上述两种抑制情况下的抑制程度各有多大？