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吸光光度法的应用 一、微量组分的测量 四、络合物组成的测定 五、酸碱离解常数的测定 二、示差分光光度法 三、光度滴定法 六、双波长分光光度法 一、微量组分的测量 1.单组分的测定 A-c 标准曲线法 例1 水中六价铬的测定 国家标准（GB）采用二苯碳酰二肼分光光度法测定六价铬。 在酸性条件下，六价铬与二苯碳酰二肼反应生成紫外红色络合物，λmax＝540 nm， ε＝2.6×104~4.17×104 L·mol-1·cm-1。 举 例 例2 维生素B6注射液的测定 维生素B6在290 ± 1 nm处有最大吸收，药典采用紫外可见分光光度法测定维生素B6注射液。测量在0.1 mol·L-1HCl介质中进行，按 计算维生素B6的含量。 例3 蛋白质在280 nm处有最大吸收，可用于蛋白质的定量测定。 例4 氨基酸与茚三酮反应生成红色络合物，可用于氨基酸含量的测定。 2.双组分的测定 同时测定一种试样中的多种组分的基础： 是吸光度具有加合性，即总吸光度为各个组分吸光度的总和。 设试液中含有两种吸光物质X和Y，其吸收光谱互相重叠，根据吸光度的加合性，得 ε为物质得特征参数，可通过配制标准测得 ?解联立方程，可求得cX, cY。 将0.376g土壤样品溶解后定容至50mL。取25mL试液进行处理，以除去干扰元素，显色后定容至50mL，用1cm吸收池在510nm处和656nm处分别测得吸光度为0.467和0.374，计算土壤样品中钴和镍的质量分数。已知M(Co)=58.93，M(Ni)=63.55。 例题 ?/nm 510nm 656nm ?/nm 510nm 656nm ?Co 3.64×104 1.24×103 ?Ni 5.52×104 1.75×104 钴和镍的配合物有如下数据: 解：已知b=1cm，由公式A=?bc和吸光度的加和性，可得联立方程组： A510= A656= 即 解得 =9.70×10-6 (mol·L-1) =2.06×10-5(mol·L-1) 土壤样品中Co和Ni的含量计算如下： =0.015% =0.032% 二. 示差分光光度法 常规分光光度法只适用于微量或痕量组分的测定，而不适合常量组分(2~5%)。 原因：当被测组分含量高时，常常偏离朗伯-比耳定律。即使不偏离，由于吸光度太大，也超出了准确读数的范围，就是把分析误差控制在5%以下，对高含量成分也是不符合要求的。 若采用示差法，可以提高测量的准确度。 1. 方 法 常规法：以空白试剂（c=0）为参比 示差法：以浓度为cs 的标准溶液为参比 (cxcS 时，适宜高浓度的测定) 2. 示差法的误差 方 法? 定 量 误 差 常规法? 示差法? 因 I0IS 故 TrTx 有 结 论：示差法提高了准确度 1. 已知ST ＝ 0.01,样品Tx = 2.00％，标准TS = 10.0% 例 题 示差法? 常规法误差? 示差法误差? 结论： 示差法提高了准确度 2. 已知ST ＝ 0.01,样品Tx = 2.00％，标准TS = 5.00% 3、例题 3、例题 3.提高测量准确度的实质 示差法相对于常规光度法来说，提高测量准确度的原因是扩展了读数标尺。 4. 示差法仪器构造的要求 原因：示差光度法需要一个发射强度较大的光源，才能将高浓度参比溶液的 A 调至零。 采用专门设计的示差光度计，这就使其应用受到了一定限制。 1. 用一般光度法测 0.0010mol.L-1 锌标液和含锌的试液，分别测得 As = 0.700 和 Ax =1.00，两溶液的透光度相差多少？若用 0.0010mol.L-1锌标液作参比，试液的A为多少？示差光度法与一般光度法相比，读数标尺放大了多少倍？ 例题 三、光度滴定法 光度滴定法是依据滴定过程中溶液的吸光度的突变来确定滴定终点的滴定分析方法。 例, 滴定反应M + R = MR 随着 R 的加入，[M] ↑[MR] ↑ ,滴定曲线随各物质的吸收性质的不同而不同。 四、络合物组成的测定 1. 摩尔比法 2.等摩尔连续变化法 1. 摩尔比法 在一定条件下，假设(M)金属离子与络合剂发生显色反应： M + nR = MRn 为了测络合比n，可固定cM，改变cR 测定方法： ①固定cM ，改变cR ②配一系列 cR/cM 不同的溶液 ③在?max处，测A ④以A—cR/cM作曲线 图3-3 摩尔比法 适应范围：此法适用于