八重组DNA与现代生物技术.docVIP

第八章 重组DNA与现代生物技术 第一节 农业生产中的应用 转基因工程技术主要用于提高农作物的抗逆能力,以及改良农作物的品质和利用植物生产药物等方面. 1.抗虫转基因植物 2.抗病转基因植物 3.其他抗逆转基因植物 抗除草剂 抗冻番茄 4.利用转基因改良植物的品质 转基因赖氨酸玉米 变色矮牵牛 基因工程在农业上的应用： 1）高产、稳产和具优良品质的品种 用基因工程的方法可以改善粮食作物的蛋白质含量。如“转基因高赖氨酸玉米”植株。 2）抗逆性品种 将细菌的抗虫、抗病毒、抗除草剂、抗盐碱、抗干旱、抗高寒等抗性基因转移到作物体内，将从根本上改变作物的特性。如转基因抗虫棉。 第二节 重组DNA与药品生产 美国批准上市的基因工程药品有人类胰岛素、人类生长因子、白介素、干扰素、牛型生长激素疫苗等。 我国自1986年“863”计划实施以来，至2000年已有15种基因工程药物，3个基因工程疫苗和数十个重组诊断试剂投放市场。 人用蛋白质药物传统生产的弊端： 成本高；产率和产量低；原料易污染，不安全。 基因工程药物可以克服传统方法生产蛋白药物的困难，原因： ①可解决蛋白药物的产量问题，只需生长旺盛的表达系统；②微生物容易大量培养，能够降低成本；③基因工程生产人源的蛋白质药物安全、有效；④通过基因工程队编码基因改造以改造蛋白质结构，使之更稳定，活性更高，副作用更低。 基因工程药物生产的主要步骤 一、分离编码蛋白药物的DNA或cDNA：①提取蛋白，纯化，测部分序列，推测编码序列，合成探针，从文库中筛选基因； ②用已经纯化的蛋白质制备抗体，然后从表达文库中筛选二、优化基因表达的条件： ①表达蛋白的功能； ②表达量的多少 一、人生长激素的生产 人生长激素（hGH）是脑下垂体前叶分泌的蛋白质类激素，对人体除神经组织以外的所有组织（包括骨骼、肌肉、结缔组织、毛发和皮肤等）都有促进生长的功能。间接地还能促进脂肪和糖类的降解，增强蛋白质和核酸的合成作用。 近年来的研究发现，生长激素在治疗侏儒症、烧伤、肥胖、出血性溃疡及在维持肌肉的活力、改善心脏功能、延缓衰老、防治骨质疏松、促进伤口愈合等方面均具有重要的作用。此外，对免疫系统也具有一定的增强作用。 以前，要获得生长激素，需解剖尸体，从大脑的底部摘取垂体，并从中提取生长激素。 1979年，人类首次利用基因工程技术在大肠杆菌中表达了人的生长激素，1985年美国FDA首先批准了重组人生长激素上市。人们从 450 L大肠杆菌培养液中提取的生长激素，相当于6万具尸体的全部产量。 应用DNA重组技术，在大肠杆菌中表达人生长激素，有两条不同的技术路线“其一是生产胞内型的重组人生长激素； 其二是生产分泌型的重组人生长激素。 技术关键是：构建能够在大肠杆菌细胞中表达人生长激素的表达载体 二、影响我国生物制药产业发展的因素 1.研发投入 国外：2－3亿美元/基因药物 国内：10多年来，对生物制药的总投入仅有40多亿元 2.投融资与产业化模式 国外：政府、企业、科研院所三位一体，大、中小企业结成战略联盟 国内：政府、企业、科研院所各自为政或偶尔两两结合，投融资机制不健全 3.市场竞争环境 国外：市场竞争激烈，但秩序较好，市场份额 多为大公司所垄断 国内：仿制与重复建设、重复生产现象非常严 重，出现了一哄而上的过热现象，市场恶 性竞争，无法实现规模效益 4.产品信誉 国外：产品信誉较好 国内：产品信誉低，“出现信洋不信中，买洋不 买中”现象 5.创新与知识产权 国外：创新意识高，特别注重知识产权（主要 是专利、商标）保护 国内：创新意识低，严重缺乏自主知识产权产品，当前，我国已产业化的21种基因工程药物和疫苗中只有3种拥有自主知识产权，其他均为仿制产品 第三节 蛋白质工程 所谓蛋白质工程，就是利用基因工程手段，包括基因的定点突变和基因表达对蛋白质进行改造，以期获得性质和功能更加完善的蛋白质分子。 基本内容包括：一、按实际要求，周密审慎地设计新型蛋白质的氨基酸序列结构；二 、通过基因克隆等程序，在适当的寄主细胞中表达比天然蛋白质结构和特性更加优良的新型蛋白质；三、分离纯化符合商业标准的新型蛋白质 目前，主要集中在改造现有蛋白质这一领域。一般步骤： （1）分离纯化需改造的目的蛋白 （2）对纯化的蛋白进行氨基酸测序、x射线晶体衍射分析、核磁共振分析等。 3）通过蛋白结构设计核酸引物或探针，从文库中获取编码该蛋白的基因。 （4）设计改造方案并进行改造基因序列。 （5）把改造的基因片断插入适当的载体，表达产物。 （6）分离纯化产物并进行功能检测。 一、定点诱变策略 定义：指在DN