灌装线洗瓶机清洗消毒效果验证管理.pptVIP

所需材料 稀释水瓶，99ml 灭菌试验所需材料：过滤膜，缓冲液，培养皿，培养基，移液管，稀释瓶 不锈钢镊子：5.5inch, 10.5inch. 丙烷灯或煤气灯 细菌样片（聚碳酸酯、聚乙烯或铝箔） 双面粘胶（3M公司） 铜绿假单胞菌（ATCC#9027） 胰蛋白酶大豆肉汤（TSA） 胰蛋白酶大豆琼脂（TSB） 磷酸缓冲盐（PBS，0.9%盐，PH7.3） 离心管（15ml) * 所需材料 离心机 培养箱（30℃与37℃） 能保持80%相对温度的潮湿箱 高压灭菌器 70%酒精 旋转式无菌袋（6”×9”） 绝缘的样品冷却箱（转移细菌样片用） 皮氏培养皿（直径150mm×高度25mm) * 细菌悬浮液的配制 从铜绿假单胞菌的纯培养基上移取菌种 35℃培养24小时，长成明显的菌落。 用接种环挑选一个独立的铜绿假单胞菌菌落，加到装有10ml胰蛋白酶大豆肉汤的15ml无菌离心管中。 放在35 ℃培养箱中培养18小时。 取出离心管并冷却到室温。 3400rpm转速下离心15分钟。 将上层液液倒到高压灭菌瓶中灭菌。 * 细菌悬浮液的配制 再加入10ml磷酸缓冲液，3400rpm下离心15分钟。 重复离心2分钟，去掉细菌细胞。 再加入10ml磷酸缓冲液，3400rpm下离心15分钟。 将上层液按不同比例稀释再培养，控制最终菌落数在30-300之内，乘上稀释比例计算细菌数量。 标记所有待测菌