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第10章 高效液相色谱法 主要内容 高效液相色谱法概述 1. 高效液相色谱法类型 1. 高效液相色谱法类型 1. 高效液相色谱法类型 1. 高效液相色谱法类型 1. 高效液相色谱法类型 1. 高效液相色谱法类型 1. 高效液相色谱法类型 1. 高效液相色谱法类型 1. 高效液相色谱法类型 1. 高效液相色谱法类型 1. 高效液相色谱法类型 1. 高效液相色谱法类型 1. 高效液相色谱法类型 1. 高效液相色谱法类型 1. 高效液相色谱法类型 2.常用固定相与流动相 2.常用固定相与流动相 2.常用固定相与流动相 2.常用固定相与流动相 2.常用固定相与流动相 3.高效液相色谱仪 3.高效液相色谱仪 3.高效液相色谱仪 3.高效液相色谱仪 3.高效液相色谱仪 3.高效液相色谱仪 3.高效液相色谱仪 3.高效液相色谱仪 3.高效液相色谱仪 3.高效液相色谱仪 3.高效液相色谱仪 3.高效液相色谱仪 3.高效液相色谱仪 3.高效液相色谱仪 3.高效液相色谱仪 3.高效液相色谱仪 3.高效液相色谱仪 3.高效液相色谱仪 3.高效液相色谱仪 3.高效液相色谱仪 3.高效液相色谱仪 3.高效液相色谱仪 3.高效液相色谱仪 3.高效液相色谱仪 3.高效液相色谱仪 3.高效液相色谱仪 3.高效液相色谱仪 3.高效液相色谱仪 3.高效液相色谱仪 3.高效液相色谱仪 3.高效液相色谱仪 3.高效液相色谱仪 3.高效液相色谱仪 3.高效液相色谱仪 4.高效液相色谱条件选择 4.高效液相色谱条件选择 4.高效液相色谱条件选择 4.高效液相色谱条件选择 4.高效液相色谱条件选择 5.应用与示例 5.应用与示例 5.应用与示例 5.应用与示例 5.应用与示例 5.应用与示例 Thank You! 1）加入调节剂 2）加入改性剂 在流动相中加入不同极性的溶剂，调节其极性，获得不同的选择性。 改善分离的选择性。 3）梯度洗脱 等度洗脱（恒组成溶剂洗脱） 以固定配比的溶剂系统洗脱组分。 即不断改变其极性 适于分析极性差别较大的复杂组分 类似GC的程序升温（沸程较长样品） 梯度洗脱 在一定分析周期内不断变换流动相的种类和比例。 (3) 高效液相色谱仪操作注意事项 溶剂及pH 样品的净化预处理 系统压力 最大样品量和最小检测质量 色谱柱清洗 (1) 定性分析方法 同一物质在相同色谱条件下保留时间相同 只适用于已知范围的未知物 操作方法为往样品中加入某已知纯物质(对照品)，混匀进样。对比加入前后的色谱图 1）色谱鉴别法 2）化学鉴别法 利用专属性化学反应对分离后收集的组分来进行 只能鉴别组分属于哪一类化合物 方法为收集色谱馏分，与相应试剂反应来确定官能团 ② 贮液罐 混合器在泵前,由一个泵将流动相吸入，混合时和大气是相通的，是常压，所以叫低压梯度。相对于高压梯度价格便宜，但精度一般要比高压梯度低，而且要有脱气。 是两个泵分别将流动相打入混合器中，混合器另一端与柱相连，会产生较高的压力；高压梯度精度高、适合任意比例。一般不需要在线脱气。如果条件许可建议使用高压梯度。 内梯度(高压梯度) 外梯度(低压梯度) ③ 梯度洗脱装置 HPLC的流动相必须预先脱气，否则容易在系统内逸出气泡，影响泵的工作及检测结果。 ④ 脱气装置 在线脱气 离线脱气 进样系统包括进样口、注射器、六通阀和定量管等，它的作用是把样品有效地送入色谱柱。进样装置常见的有隔膜注射进样器、停流进样器、六通进样阀和自动进样器。 2) 进样系统 一般HPLC分析常用六通进样阀，其关键部件由圆形密封垫(转子)和固定底座(定子)组成，可以直接向压力系统进样而不必停止流动相的流动。当六通阀处于进样位置时，样品用注射器注射入贮样管，转至进柱位时，贮样管内样品被流动相带入色谱柱。用六通阀进样，柱效率低于隔膜进样，但耐高压，进样量准确，重复性好，操作方便。 ① 六通阀手动进样器 自动进样器可通过计算机自动控制。一批可以自动进样几十个或上百个，可连续调节，重复性较高，用于大量样品的常规分析。 ② 自动进样器 色谱分离系统包括色谱柱、恒温装置、保护柱和连接阀等。分离系统性能的好坏是色谱分析的关键。采用最佳的色谱分离系统，充分发挥系统的分离效能是色谱工作中重要的一环。 其中，色谱柱担负分离作用，是色谱系统的心脏。对色谱柱的要求是柱效高、选择性好、分析速度快等。 3) 分离系统 ① 色谱柱 色谱柱包括柱子和固定相两部。 液相色谱的固定相是将固定该涂在担体上而成。担体有两类：一类是表面多孔型担体另一类是全多孔型担体。近年来又出现了全多孔型微粒担体。这种担体粒度为5~10 μm，是由nm级的硅胶微粒堆积而成，又叫