[化学]荧光光谱分析法及F7000光度计的使用20120602.pptVIP

分子荧光分析法;一、基本原理;一、基本原理;一、基本原理;一、基本原理; 小结：分子能级与跃迁 基态(S0)→激发态：吸收特定频率的辐射；量子化；跃迁一次到位； 激发态→基态：多种途径和方式(见能级图)；速度最快、激发态寿命最短的途径占优势，发生的几率大； 第一、第二、…电子激发单重态 S1 、S2… ； 第一、第二、…电子激发三重态 T1 、 T2 … ； 电子能级的多重性 M=2S+1 平行自旋比成对自旋稳定(洪特规则)，三重态能级比相应单重态能级低； 大多数有机分子的基态处于单重态;一、基本原理;二、荧光的激发光谱与发射光谱;二、荧光的激发光谱与发射光谱;（2）荧光的发射光谱（荧光光谱） 荧光光谱表示在所发射的荧光中各种波长组分的相对强度。绘制发射光谱时， 使激发光波长固定在?ex处，然后对发射光谱扫描，测定各种波长下相应的荧光强度，以荧光强度F 对发射波长?作图，得发射光谱图（即荧光光谱）。;二、荧光的激发光谱与发射光谱;二、荧光的激发光谱与发射光谱;Stokes位移 荧光光谱总是位于物质激发光谱的长波一侧，即荧光波长大于激发光波长的现象。 激发光谱与发射光谱之间的波长差值：振动弛豫、内转换等物辐射跃迁损失了部分能量。 荧光光谱的形状与激发波长无关 电子可以跃迁到不同激发态能级，吸收不同波长的能量 镜像规则 由于电子基态的振动能级分布与激发态相似，故通常荧光光谱与它的激发光谱成镜像对称关系。;二、荧光的激发光谱与发射光谱;基态上的各振动能级分布与第一激发态上的各振动能级分布类似； 基态上的某振动能级若跃迁到第一激发态的某振动能级的几率较大的话，相反跃迁也如此。 ;二、荧光的激发光谱与发射光谱;二、荧光效率及其影响因素;荧光效率与分子结构的关系 （1）跃迁类型：?* → ?的荧光效率高，系间跨越过程的速率常数小，有利于荧光的产生； （2）共轭效应：提高共轭度有利于增加荧光效率并产生红移 （3）刚性平面结构：可降低分子振动，减少与溶剂的相互作用，故具有很强的荧光。如荧光素和酚酞有相似结构，荧光素有很强的荧光，酚酞却没??。 （4）取代基效应：芳环上有供电子基，使荧光增强。;;20;影响荧光强度的外部因素 （1）溶剂的影响 同一物质在不同溶剂中，其荧光光谱的形状和强度都有差别。一般情况下，荧光波长随着溶剂极性的增大而长移，荧光强度也有所增强。这是因为在极性溶剂中，π-π*跃迁所需的能量差△E小，而且跃迁几率增加，从而使紫外吸收波长和荧光波长均长移，强度也增强。 ; 溶剂粘度减小时，可以增加分子间碰撞机会，使无辐射跃迁增加而荧光减弱。故荧光强度随溶剂粘度的减小而减弱。由于温度对溶剂的粘度有影响，一般是温度上升，溶剂粘度变小，因此温度上升，荧光强度下降。;（2）温度的影响 荧光强度对温度变化敏感，温度增加，分子运动速度加快，分子间碰撞的几率增加，外转换去活的几率增加，荧光效率降低。例如荧光素钠的乙醇溶液，在0℃以下，温度每降低10℃，? f增加3％，在?80℃时， ? f为1。 ;（3）对酸碱化合物，溶液pH的影响较大，需要严格控制 当荧光物质本身是弱酸或弱碱时，溶液的pH值对该荧光物质的荧光强度有较大影响，这主要是因为在不同酸度中分子和离子间的平衡改变，离子结构发生变化，因此荧光强度也有差异。每一种荧光物质都有它最适宜的发射荧光的存在形式，也就是有它最适宜的pH值范围。 ;二、荧光效率及其影响因素;二、荧光效率及其影响因素;二、荧光效率及其影响因素;(5)荧光熄灭剂 荧光熄灭是指荧光物质分子与溶剂分子或溶质分子相互作用引起荧光强度降低的现象。引起荧光熄灭的物质称为荧光熄灭剂(quenching medium)。如卤素离子、重金属离子、氧分子以及硝基化合物、重氮化合物、羰基和羧基化合物均为常见的荧光熄灭剂。;二、荧光效率及其影响因素;二、荧光效率及其影响因素;二、荧光效率及其影响因素;二、荧光效率及其影响因素;三、荧光分析法的应用;无机化合物的分析 能够同金属离子形成荧光络合物的有机试剂绝大多数是芳香族化合物。它们通常含有两个或两个以上的官能团，能与金属离子形成五元环或六元环的螯合物。 由于螯合物的生成，分子的刚性平面结构增大，使原来不发荧光或荧光弱的化合物转变为强荧光化合物。;三、荧光分析法的应用;三、荧光分析法的应用;三、荧光分析法的应用;荧光强度与物质浓度的关系： 当一束强度为I0的紫外/可见光照射一浓度为c、液层厚度为d的液槽时，可在溶液的各个方向观察到荧光。