CTAB法提取质粒DNA的探讨.pdf

泰　山　医　学　院　学　报 ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＴＡＩＳＨＡＮＭＥＤＩＣＡＬＣＯＬＬＥＧＥ　Ｖｏｌ３８　Ｎｏ３　２０１７ ２８７ ＣＴＡＢ法提取质粒 ＤＮＡ的探讨 张素娥　张潇月　刘　辉　张显忠 （泰山医学院，山东 泰安　２７１０１６） 摘要：目的　利用ＣＴＡＢ性质，建立一种快速、简单、高效的质粒ＤＮＡ提取方法。方法　从ＣＴＡＢ的浓度、时间、 ｐＨ值、温度和盐溶液浓度几个方面进行质粒ＤＮＡ提取方法的探讨，与传统碱裂解方法进行比较，经ＤＮＡ条带回收， ＰＣＲ实验扩增已知插入片断，来验证ＣＴＡＢ法提取细菌质粒ＤＮＡ的实验效果。结果　ＣＴＡＢ法提取质粒ＤＮＡ，在质 和量方面均优于碱裂解法。单因素法对ＣＴＡＢ提取质粒方法探讨，最适ＣＴＡＢ浓度、ｐＨ值、水浴时间、温度分别为 ０６％（ｗ／ｖ）、７０，１５ｍｉｎ，６０℃。虽然４×ＣＴＡＢ也有较好效果，但需加１５ｍｏｌ／Ｌ的ＮａＣｌ溶液，才利于上清液的分 离。ＰＣＲ结果进一步验证ＤＮＡ的纯度和性质。结论　ＣＴＡＢ法提取质粒ＤＮＡ方法简单、快速，质量和纯度完全可以 替代传统方法用于分子生物学后续实验。 关键词：ＣＴＡＢ；质粒ＤＮＡ；提取 中图分类号：Ｒ３１８　文献标识码：Ａ　文章编号：１００４７１１５（２０１７）０３０２８７０３ ｄｏｉ：１０３９６９／ｊｉｓｓｎ１００４７１１５２０１７０３０１７ ＤｉｓｃｕｓｓｉｏｎＣＴＡＢｍｅｔｈｏｄｔｏｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆｐｌａｓｍｉｄＤＮＡ ＺＨＡＮＧＳｕｅＺＨＡＮＧＸｉａｏｙｕｅＬＩＵＨｕｉＺＨＡＮＧＸｉａｎｚｈｏｎｇ （ＴａｉｓｈａｎＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔａｉａｎ２７１０００，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｐｕｒｐｏｓｅ：Ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｒａｐｉｄ，ｓｉｍｐｌｅａｎｄｅｆｆｉｃｉｅｎｔｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆｐｌａｓｍｉｄＤＮＡｂｙｕｓｉｎｇｔｈｅ ＣＴＡＢｐｒｏｐｅｒｔｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＴｈｅｓｔｕｄｙｗａｓｍａｄｅｂｙｔｈｅｍｅｔｈｏｄｏｆｅｘｔｒａｃｔｉｎｇｐｌａｓｍｉｄＤＮＡｆｒｏｍＣＴＡＢｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ｔｉｍｅ，ｐＨ ｖａｌｕｅ，ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅａｎｄｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｓａｌｔｓｏｌｕｔｉｏｎ，ａｎｄｃｏｍｐａｒｅｄｗｉｔｈｔｈｅｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌａｌｋａｌｉｎｅａｎａｌｙｓｉｓｍｅｔｈｏｄ．ＤＮＡｂａｎｄ ｒｅｃｏｖｅｒｙａｎｄＰＣＲｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｋｎｏｗｎｉｎｓｅｒｔｆｒａｇｍｅｎｔｓｗｅｒｅｕｓｅｄｔｏｖｅｒｉｆｙｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｒｅｓｕｌｔｓｏｆＣＴＡＢ ｍｅｔｈｏｄｔｏｅｘｔｒａｃｔｂａｃｔｅｒｉａｌｐｌａｓｍｉｄＤＮＡ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＣＴＡＢｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆｐｌａｓｍｉｄＤＮＡｗｅｒｅｂｅｔｔｅｒｔｈａｎａｌｋａｌｉｎｅａｎａｌｙｓｉｓｍｅｔｈｏｄ ｉｎｔｅｒｍｓｏｆｑｕａｌｉｔｙａｎｄｑｕａｎｔｉｔｙ．ＢｙｔｈｅｓｉｎｇｌｅｆａｃｔｏｒｍｅｔｈｏｄｆｏｒｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｏｆｐｌａｓｍｉｄＣＴＡＢｍｅｔｈｏｄ，ｔｈｅｏｐｔｉｍｕｍＣＴＡＢｃｏｎ ｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ｐＨｖａｌｕｅ，ｔｉｍｅａｎｄｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｏｆｗａｔｅｒｂａｔｈｗｅｒｅ０．６％ （ｗ／ｖ），７，１５ｍｉｎａｎｄ６０℃．Ａｌｔｈｏｕｇｈ４×ＣＴＡＢａｌｓｏ ｈａｄａｇｏｏｄｅｆｆｅｃｔ，ｂｕｔＮａＣｌ１．５ｍｏｌ／Ｌｓｏｌｕｔｉｏｎｎｅｅｄｂｅａｄｄｅｄ，ａｎｄｉｓｃｏｎｄｕｃｉｖｅｔｏｔｈｅｓｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｓｕｐｅｒｎａｔａｎｔ．ＰＣＲｒｅ ｓｕｌｔｓｆｕｒｔｈｅｒｖｅｒｉｆｉｅｄｔｈｅｐｕｒｉｔｙａｎｄｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｏｆＤＮＡ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＣＴＡＢｍｅｔｈｏｄｉｓｓｉｍｐｌｅａｎｄｒａｐｉｄ，ａｎｄｔｈｅｑｕａｌｉｔｙａｎｄｐｕ ｒｉｔｙｏｆｐｌａｓｍｉｄＤＮＡｃａｎｂｅｒｅｐｌａｃｅｄｂｙｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌｍｅｔｈｏｄｓｆｏｒｍｏｌｅ