生物技术制药试验.docVIP

生物技术制药实验 武汉大学药学院 生物技术实验室 湖北·武汉  目 录 实验一 质粒DNA的小量制备 实验二 质粒DNA电泳鉴定 实验三 感受态细胞的制备和转化 实验四 目的基因的表达及表达产物的初步提取 实验五 蛋白质纯化—盐析沉淀法 实验六 凝胶过滤层析 实验七 蛋白质免疫印迹实验（Western Blotting） 实验八 HRP结合物的过碘酸钠交联法  实验一 质粒DNA的小量制备 【目的】 学会最常用的碱裂解法小量制备质粒DNA的方法。 【原理】 根据共价闭合环状质粒DNA与线性DNA在拓扑学上的差异来分离。在pH12.0(12.5这个狭窄的范围内，线性DNA双螺旋结构解开而被变性。尽管在这样的条件下共价闭合环状质粒DNA也会变性，但两条互补链彼此互相盘绕，仍会紧密结合在一起。当加入pH4.8的乙酸钾高盐缓冲液使pH恢复中性时，共价闭合环状质粒DNA复性快，而线性的染色体DNA复性缓慢，经过离心与蛋白质和大分子RNA等发生共沉淀下去而被去除。 【器材】 超净工作台，接种环，酒精灯，台式离心机，旋涡混合器，微量移液器，1.5ml微量离心管，恒温摇床，试管，双面微量离心管架，试管架，标签纸，磁力搅拌机。 【试剂】 pET-28a质粒载体菌, LB培养基1000ml（含10(g/ml卡那霉素），葡萄糖/Tris/EDTA 溶液（溶液 I），NaO