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一、基因工程的工具及其操作程序 1．基因工程的基本工具 2.基因工程的基本操作程序 (1)目的基因的获取 ①从基因文库中获取目的基因 优点：有了基因文库，就可以随时从中提取所需要的目的基因，引入受体细胞使之表达。 ②人工合成目的基因 ③利用PCR技术扩增目的基因 a．PCR：是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。PCR扩增是获取目的基因的一种非常有用的方法，也是进行分子鉴定和检测的一种很灵敏的方法。 b．目的：通过指数式扩增获取大量的目的基因。 (2)基因表达载体的构建 ①目的： (2)基因表达载体的构建方法 (1)一般来说，天然载体往往不能满足人类的所有要求，因此人们根据不同的目的和需要，需要对某些天然的载体进行人工改造。 (2)插入的目的基因的表达需要调控序列，因而用作载体的质粒的插入部位之前需有启动子，之后需有终止子。 1．(2009年潍坊模拟)质粒作为“分子运输车”的条件是 (　　) ①能够自我复制　②双链环状DNA分子　③有多个限制酶切点　④有标记基因　⑤真核细胞中没有 A．①②③④⑤　　 B．①②③④ C．①③④ D．②③⑤ 2．(2009年南通调研)下列关于基因表达载体构建的相关叙述，不正确的是 (　　) A．需要限制酶和DNA连接酶 B．必须在细胞内进行 C．抗生素抗性基因可作为标记基因 D．启动子位于目的基因的首端 (3)将目的基因导入受体细胞 ①目的：目的基因进入受体细胞内并在受体细胞内维持稳定和表达的过程。 ②受体细胞种类不同，导入方法不同。 (4)目的基因的检测与鉴定 二、基因工程的应用成果及蛋白质工程 1．基因工程的应用成果 (1)乳腺生物反应器与微生物生产的比较 乳腺生物反应器受生物性别的限制，若从动物尿液中提取目的基因产物则不受性别限制。 (2)基因治疗 基因治疗是治疗人类遗传病的根本方法，但由于尚未全面了解基因调控机制和疾病的分子机理，基因治疗只处于初期的临床试验阶段。 2．蛋白质工程 (1)概念：是指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需求。 (2)过程：预期蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到对应的脱氧核苷酸序列。 (3)蛋白质工程与基因工程比较 蛋白质工程的实施步骤(蛋白质工程的实质即“中心法则”的逆推： 3．(2010年南京调研)下列关于蛋白质工程的说法，正确的是 (　　) A．蛋白质工程是在分子水平上对蛋白质分子直接进行操作 B．蛋白质工程能生产出自然界中不曾存在过的新型蛋白质分子 C．对蛋白质的改造是通过直接改造相应的mRNA来实现的 D．蛋白质工程的流程和天然蛋白质合成的过程是相同的 (2009年高考浙江理综卷)下列关于基因工程的叙述，错误的是 A．目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物 B．限制性核酸内切酶和DNA连接酶是两类常用的工具酶 C．人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性 4．继哺乳动物乳腺生物反应器研发成功后，膀胱生物反应器的研究也取得了一定进展。最近，科学家培育出一种转基因小鼠，其膀胱上皮细胞可以合成人的生长激素并分泌到尿液中。请回答： (1)将人的生长激素基因导入小鼠受体细胞，常用方法是______________。 (2)进行基因转移时，通常要将外源基因转入____________________中，原因是_____________________________________。 (3)通常采用__________________技术检测外源基因是否插入了小鼠的基因组。 (4)在研制膀胱生物反应器时，应使外源基因在小鼠的________细胞中特异表达。 (5)为使外源基因在后代长期保持，可将转基因小鼠体细胞的________转入________细胞中构成重组细胞，使其发育成与供体具有相同性状的个体。该技术称为________。 学科网(ZXXK.COM ）-网校通名校系列资料上学科网，下精品资料！ * 学科网(ZXXK.COM ）-网校通名校系列资料上学科网，下精品资料！ * 选修3　现代生物科技专题 专题1 基因工程 作用 部位 作用 限制酶 DNA连接酶 载体 切割目的基因和载体 连接DNA片段，形成重组DNA 携带目的基因进入受体细胞 核苷酸的脱氧核糖与磷酸间形成的磷酸二酯键 常用 类型 作用 特点 (条件) 载体 DNA连接酶 限制酶 (1)识别特定的核苷酸序列 (2)在特定位点上切割 (1)E·coli DNA连接酶只连接黏性末端 (2)T4DNA连接酶连接黏性末端和平末端 (1)能在宿主细胞内稳定存在并大量复制 (2)有多个限制酶切割位点