PCR_教材教学课件.pptxVIP

聚合酶链反应（PCR）聚合酶链（PCR）技术PCR反应体系PCR技术过程及原理.聚合酶链反应技术聚合酶链反应（PCR）技术是一个能在试管内模仿细胞内核酸复制过程，也就是能在体外特异地扩增一段特定核酸序列的技术.PCR的反应体系 模板 引物 dNTPTaq DNA聚合酶Mg2+缓冲液.参与PCR反应的成分：.模板：即为要被复制的核酸片段条件：需要较高的纯度.引物：化学合成的寡核苷酸条件：1.一般长度为20个核苷酸 2.两条引物的序列不能互补 3.两条引物之间的Tm值不能相差太多 .dNTP:4种核苷酸条件：4种核苷酸的浓度需要一致，否则容易出现DNA聚合酶错配的概率.Taq DNA聚合酶：是从水栖嗜热菌中提取的一种酶，能催化DNA合成。具有5’端→3’端的外切酶活性。.Mg2+：是Taq DNA聚合酶的辅助因子，可以稳定其活性退火将反应体系温度将至熔点温度以下（40~70℃），以便使引物与模板DNA序列互补，形成杂交链。 40~70℃ 引物与DNA模板杂交 .延伸将反应体系的温度升至72℃，此时反应体系按照模板链的序列以碱基互补配对的原则一次把dNTP加至引物的3’端，在Taq DNA聚合酶的作用下，杂交链不断延伸，直至形成新的DNA双链。新的DNA又可以作为下一个模板进行扩增，如此反复循环，可以到达数十万倍到百万倍的扩增数 72℃ 4种dNTP在引物和DNA聚