第5章_生殖细胞工程教材教学课件.ppt

三、胚胎培养的类型 胚胎培养的对象，可以是胚胎发育过程中不同阶段的胚体。根据胚胎发 育对营养的要求，可分为两个阶段： 异养期，处于这一时期的幼小胚胎完全依赖周围组织提供的营养物质。 自养期，在此时期，胚胎能吸收培养基中的营养物质，经过自身的代谢作用合成其生长所必需的物质。 培养基: 培养条件：糖类、附加成分、光照、 培养方式： A. 幼胚培养适于液体培养， B. 成熟胚适于固体培养 胚胎培养的基本技术 1、胚培养 胚培养可以分为两大类型：成熟胚培养和幼胚培养 胚培养：采用人工的方法将胚从种子、子房或胚珠中分离出来，再放在无菌的条件下，让其进一步生长发育，以至形成幼苗的过程。 1）胚培养的意义 (1)在远缘杂交育种中:克服杂种胚不能正常发育； (2)克服珠心胚的干扰,提高育种效率； (3)缩短育种周期； (4)测定休眠种子的萌发率； (5)用于快速繁殖：幼胚具有较高再生能力，可通过体细胞胚胎发生的途径产生大量的体细胞胚； (6)利用幼胚培养诱发变异，选育新品种； (7)为原生质体培养、细胞融合及遗传转化提供实验材料； (8)理论研究中的应用。 （1）成熟胚培养 A. 成熟胚是指子叶已经成熟的种胚。培养时只需提供一定的温度和湿度条件就可以萌发并长成植株。 B. 培养方法： 　将接近成熟的果实或种子（带表皮）进行表面灭菌后，剥取种胚接种于培养基上，使裸露的胚在人工控制的条件下萌发和生长，直接形成完整的植株。 2）胚培养过程： 实例（玉米成熟胚培养） a. 取玉米种子，放在95％的酒精中消毒10s，然后用蒸馏水冲洗。检查果皮是否完整，若有水进入果皮中而呈透明斑块的种粒，应丢弃。保留那些果皮完整、外貌无改变的种子。在无菌条件下，将种子放入75％乙醇中消毒15s，用无菌水冲洗3次，用0.1%升汞浸泡10-20分钟，用无菌水冲洗3次； b. 把种子放置到有一张湿润的无菌滤纸的培养皿 ,于25℃的黑暗条件下培育6h,种子将吸水膨胀并变软；　 c.胚的剥离：取一粒种子放在无菌培养皿中，用镊子夹住，用另一把镊子轻轻剥去种皮，用解剖刀沿着胚胎的边缘小心切去胚乳，暴露出位于其下方的种胚的一部分，即盾片。分离出胚胎后，用无菌水冲洗3次，然后接种于MS＋0.5mg/l细胞分裂素培养基上； d.于25℃黑暗环境中培养； e.大约2天后出现胚根，3-4天后出现胚芽，7-9天后出生根和生长，并出现一些不定根，10天后即长成小苗。 2) 幼胚培养 幼胚培养：对胚龄处于原胚期（即多细胞原胚）、球形胚、心型胚、鱼雷型胚及早期子叶型胚的胚进行的培养。在这几个时期，幼胚在生理及形态上均还未发育成熟，仅仅提供温度和湿度条件并不能使其萌发成株。 高等植物的合子胚发育过程： 合子→球状胚 → 心形胚 → 鱼雷胚 → 子叶胚 → 成熟胚（完整的种子） 1）幼胚培养过程： 取子房 常规表面消毒 解剖镜下，取胚珠、去珠被、取出完整幼胚。 固体培养 2）幼胚的发育方式： （1）胚性发育； （2）早熟发育； （3）产生愈伤组织 3）幼胚培养的方法 （1）远缘杂种的幼胚培养 A. 杂交 B. 取材 C. 消毒 D. 剥取幼胚及接种 E. 培养 F. 驯化移栽及染色体的加倍 BACK 远缘杂交培育杂种后代（白蓝） 子房 受精胚 胚发育 胚败育 胚培养 种间杂交 A.杂交 　　根据育种目标，选择亲本，人工授粉（包括：母本去雄、套袋、授粉） 切断花柱后在断面进行授粉－百合 B. 取材 在远缘杂种幼胚败育前，将其从母体取下进行培养。注意：不同的植 物幼胚败育的时间往往不相同。 C. 消毒 由于幼胚包被在子房或种子内，消毒时间可以比其它组织稍长一些。 D. 剥取幼胚及接种 在超净工作台内，用解剖针或解剖刀将幼胚从液体胚乳中挑出，接种 于培养基上。如果幼胚太小，则需要在解剖镜下操作。 E. 培养 如果杂种胚败育较晚，胚已经发育得比较大，则往往不进入脱分化就 直接发育长成幼苗。此种情况称为“早熟萌发”，小苗的质量往往不佳。 如果杂种胚败育较早，胚还相当幼小，就需要在培养基中添加各种激 素和丰富的营养物质。 根据植物种类和再生途径的不同，添加的物质也有所不同。如果是通 过胚状体发生再生植株，一般会使用2,4-D，如果是通过不定芽再分化， 则可使用生长素和分裂素。 F. 驯化移栽与染色体加倍 染色体加倍，如白菜2n=20，甘蓝2n=18，二者杂交杂种为19，不能 进行正常减数分裂，必须进行染色体加倍才能产生种子。 Ｆ．应用 利用幼胚培养克服远缘杂种不育性已在许多植物上成功，如西红柿、茄子、辣椒、油 菜、南瓜、大