植物组织培养第八章参考.pptVIP

第8章 植物细胞培养 学习目的与要求 学习重点与难点 本章主要内容 1 植物细胞培养概述 2 植物细胞培养的方法 3 植物细胞培养的影响因子 第8章 植物细胞培养 学习目的与要求 掌握植物细胞培养的影响因子与培养方法；掌握细胞悬浮培养、单细胞培养；了解固相化培养。 第8章 植物细胞培养 学习重点与难点 重点：植物细胞培养概述、植物细胞悬浮培养、植物单细胞培养、植物细胞培养的应用 难点：植物细胞培养的应用。 第8章 植物细胞培养1 植物细胞培养概述 1.1 概念 1.2 基本培养技术 1.3 细胞培养的特点 1.4 植物细胞培养反应器 第8章 植物细胞培养1 植物细胞培养概述 1.1 概念 植物细胞培养是指以单细胞或细胞团为单 位进行的植物组织培养方式。 细胞培养操作简单、试验重复性好、单次试验群体大等特点，所以越来越受到人们重视。 第8章 植物细胞培养1 植物细胞培养概述 1.2基本培养技术 (1) 植物材料 ①一般原则 筛选、预处理、灭菌处理等 ； ②特殊目的 如：诱导产生胚状体，则应选择幼嫩的胚性强的植物材料；生产次生代谢产物，选择这种次生代谢产物含量高的器官或组织等。 第8章 植物细胞培养1 植物细胞培养概述 1.2基本培养技术 （2）植物细胞培养的培养基 用于植物细胞培养的基础培养基营养成分基本上与整个植物的要求一样。 MS、B5、SH、LS培养基为最常用基本培养基。 培养中的植物细胞都需要硫胺素。 第8章 植物细胞培养1 植物细胞培养概述 1.2基本培养技术 （3）植物细胞培养方法 第8章 植物细胞培养1 植物细胞培养概述 1.3细胞培养特点 第8章 植物细胞培养1 植物细胞培养概述 1.3细胞培养特点 ⑤植物细胞需要较复杂的培养基。 ⑥植物细胞系不像微生物那样易于保存。 ⑦许多次生物质的合成与累积和细胞分化过程有关。 第8章 植物细胞培养1 植物细胞培养概述 1.3细胞培养特点 第8章 植物细胞培养1 植物细胞培养概述 1.3细胞培养特点 在通气搅拌反应器中氧传递效率一般用液 膜的体积系数kLa来表示。研究表明，kLa值 过大对细胞增殖未必有好处。 a — 比表面积， m2/m3 KL —以氧浓度为推动力的传递系数，m/s 第8章 植物细胞培养1 细胞培养概述 1.4细胞培养反应器 第8章 植物细胞培养2 细胞培养的方法 2.1 大量细胞培养 第8章 植物细胞培养2 细胞培养的方法 2.1 大量细胞培养 植物细胞悬浮培养规模 一是小规模细胞悬浮培养：一般采用摇床、转床，对愈伤组织进行液体振荡培养。 二是大规模培养细胞培养：使用生物反应器。 第8章 植物细胞培养2 细胞培养的方法 2.1 大量细胞培养 2.1.1 植物细胞悬浮培养 悬浮细胞培养是使游离的植物细胞悬浮在液体培养基中进行培养。 (1)悬浮培养细胞的诱导 ①选择一块容易碎裂的愈伤组织，转移到一种合适的培养液中，经1—2个周期的振荡培养后，得到呈分散状的细胞培养物。 第8章 植物细胞培养2 细胞培养的方法 2.1 大量细胞培养 ②选择有用的培养材料，例如无菌的幼苗或吸涨的胚胎等放在匀浆器中，破碎其软组织，随后用尼龙网收集细胞和较小细胞团，转入液体培养基中培养。 ③选择一种有用的培养材料，不管其分散易碎性如何，转移到液体培养基中振荡培养。经多次转移培养直至材料达到碎裂和较好的分散性。 第8章 植物细胞培养2 细胞培养的方法 2.1 大量细胞培养 （2）悬浮细胞的生长与增殖 细胞悬浮培养具有增加培养细胞与培养液 的接触面；可带走培养物产生的有害代谢产 物；保证氧的充分供给三个基本优点。 第8章 植物细胞培养2 细胞培养的方法 2.1 大量细胞培养 第8章 植物细胞培养2 细胞培养的方法 2.1 大量细胞培养 （3）悬浮培养物的保持 在最适的周期内（1-2周），及时继代培养，在悬浮振荡培养装置上进行培养。 第8章 植物细胞培养2 细胞培养的方法 2.1 大量细胞培养 第8章 植物细胞培养2 细胞培养的方法 2.1 大量细胞培养 （4） 悬浮培养细胞的生长测定 ②细胞体积 以每毫升培养液中细胞体积的毫升数来表示细胞体积。 ③细胞的鲜重和干重 细胞的鲜重和干重一般以每毫升悬浮培养物