[理学]发酵培养.doc

泰山虫草发酵体系的优化及产物鉴定 实验目的 通过本实验确定泰山虫草发酵的最佳体系，提高产量。 实验材料 泰山虫草株，PDA培养基 仪器与设备：500ml三角瓶，分析天平，离心机，高压蒸汽灭菌锅，超净工作台，恒温干燥箱，恒温摇床 实验方法 1.培养基配制　斜面培养基: PDA培养基;种子培养基:葡萄糖20g,蛋白胨5g, KH2 PO4 1g,MgSO4 ·7H2O 013g,麦麸50g,水1000mL, pH自然(612～613) ;基础培养基: 马铃薯200g, 蔗糖20g, K2 HPO4 015g,MgSO4 ·7H2O 012g,水1000mL, pH自然。 2.培养方法　将泰山虫草菌种接种于PDA斜面上,于24～25℃下培养5～6d,菌丝即可长满斜面;将新鲜的斜面菌种接种于种子培养基(装液量20% )中,于160 r /min、24℃下振荡培养48h,菌种变稠即可作为种子培养液以备用。 3.单因素对菌株发酵的影响 3.1　接种量的影响　分别以1%、5%、10%、15%的量接种,测定甘露醇和腺苷含量。 　3.2 装液量的影响　在500mL 三角瓶中分别装入50、100、150、200、250、300mL的基础培养基,测定甘露醇和腺苷的含量。 　3.3 初始pH的影响　将初始pH调整为4、5、6、7、8、9、10,测定甘露醇和腺苷的含量。 3.4　摇床转速的影响　转速分别为150、160、170、180、190、200 r /min,培养后测定甘露醇和腺苷的含量。 3.5　碳源的影响　在基础培养基中分别加入2%的葡萄糖、麦芽糖、乙酸钠、可溶性淀粉、蔗糖和玉米粉代替蔗糖作为碳源,测定甘露醇和腺苷的含量。 3.6　氮源的影响　在基础培养基中分别加入1%的蛋白胨、豆饼粉、酵母膏、氯化铵和硝酸铵代替马铃薯作为氮源, 测定甘露醇和腺苷的含量。 3.7　KH2 PO4 的影响　分别以0.05%、0.1%、0.15%、0.2%的量加入K2 HPO4 ,测定甘露醇和腺苷的含量。 3.8 　MgSO4 ·7H2O 的影响　分别以0.025%、0.05%、0.075%、0.1%的量加入MgSO4 ·7H2O,测定甘露醇和腺苷的含量。 4.　培养基配方正交实验　在3 实验的基础上,进行正交实验,因素水平见表1。 表1　培养基配方正交实验因素水平表