抗核抗体ANA检测试剂盒间接免疫荧光法.doc

抗核抗体（ANA）检测试剂盒 （间接免疫荧光法） 说 明 书 【产品名称】 中文名称：抗核抗体（ANA）检测试剂盒（间接免疫荧光法） 英文名称：Detection Kit for Antinuclear Antibody（Indirect Immunofluorescence） 【包装规格】 30人份/盒；50人份/盒；100人份/盒。 【预期用途】 北京和杰创新生物医学科技有限公司生产的抗核抗体（ANA）检测试剂盒（间接免疫荧光法），用于定性检测人血清或血浆中的抗核抗体（ANA），辅助诊断系统性红斑狼疮（SLE）、干燥综合征（SS）、类风湿关节炎（RA）、硬皮病（SSc）等。 【检测原理】 本试剂盒采用间接免疫荧光法（Indirect Immunofluorescence，IIF）检测抗核抗体（ANA），以HEp-2细胞（人喉癌上皮细胞）作为抗原底物，在与病人待测血清反应后，加入荧光素（FITC）标记的兔抗人IgG抗体，最终在荧光显微镜下观察结果。 【主要组成成分】 序号 组成 剂型 规格 数量 1 HEp-2抗原片 固体 3人份/张（30人份）、5人份/张（50人份）、10人份/张（100人份） 10张 2 荧光二抗 液体 1mL/支（30人份）、1.5mL/支（50人份）、3mL/支（100人份） 1支 3 ANA阳性对照 液体 0.3mL/支 1支 4 ANA阴性对照 液体 0.3mL/支 1支 5 封片剂 液体 4mL/支 1支 6 吐温 液体 2mL/支 2支 7 PBS粉剂 固体 12.2克/袋 2袋 8 盖玻片 固体 15片/盒 1盒 9 使用说明书 —— 1份 1份 其中，HEp-2抗原片主要组分为人喉癌上皮细胞（HEp-2）；荧光二抗主要组分为FITC标记的兔抗人IgG 【储存条件及有效期】 2-8℃避光保存，有效期6个月。 【样本要求】 人血清或血浆，要求清亮、无沉淀、无黄疸； 样本1周以内检测可在4℃条件下贮存。 【检验方法】 1.准备：取出HEp-2抗原片，待其恢复至室温后剪开包装。将洗涤用的PBS粉剂用蒸馏水溶解至1L，加入2ml吐温，混匀后作洗涤和标本稀释用。 2.稀释：待测血清用洗涤液作1：100稀释。 3.加样：在抗原片的反应孔内分别加入稀释好的血清和阴阳性对照，25μl/孔。注意：加样时避免产生气泡。 4.孵育：将抗原片盖在倒扣板对应的凹槽里，室温孵育30min。注意：确保每个标本均能够与抗原基质相接触，而标本之间不相互接触。 5.洗涤：取出抗原片，用洗涤液轻轻从一侧将反应液冲洗掉，浸泡至洗片缸内，静置5 min后，再用蒸馏水冲洗1次。 6.加样：在抗原片的反应孔内加入ANA荧光二抗，25μl/孔。注意：加样时避免产生气泡。 7.孵育：用纸擦去抗原片周边和反面多余液体后，将抗原片盖在倒扣板对应的凹槽里，室温孵育30min。注意：确保每个标本均能够与抗原基质相接触，而标本之间不相互接触。 8.洗涤：重复步骤5。 9.封片：?在盖玻片上滴加封片剂。用纸擦干抗原片周边和反面多余液体后，将载片的抗原基质朝下置于准备好的盖玻片上，完成封片。 10.结果观察：荧光显微镜下观察结果。 【参考值（参考范围）】 ANA阳性时因靶抗原在细胞内所处位置的不同而表现不同的荧光染色模型；ANA阴性时整个细胞无荧光或极弱的均匀荧光。 【检验结果的解释】 显微镜下可见HEp-2细胞分布均匀、胞浆丰富、细胞呈多边形伸展。ANA阴性时整个细胞无荧光或极弱的均匀荧光。ANA阳性时因靶抗原在细胞内所处位置的不同而表现不同的荧光染色模型，为接下来特异性较强的抗体检测提供了线索。常见的阳性荧光染色模型有下述6种： 均质型（homogeneous，H）：胞核荧光均匀一致，分裂期细胞染色体呈浓集染色。 斑点型（speckled，S）：胞核内荧光呈不同粗细程度的斑点或斑块状，核仁有时阳性，分裂期细胞染色体阴性。 核仁型（nucleolar，N）：核仁染色，分裂期细胞染色体阴性。 核膜型（membranous，M）：荧光染色集中在核膜边缘，重叠处浓染，核中央渐趋暗淡，分裂期细胞染色体阴性。 核点型（dots）：胞核内散布大小较一致的荧光细小颗粒，数目较少时分裂期细胞染色体多为阴性；数目较多且分裂期细胞染色体区颗粒浓集时为着丝点型（centromere）。 胞浆型（cytoplasmic）：胞核阴性，胞浆荧光染色阳性。该型因荧光颗粒粗细大小、均匀程度和分布位置等不同而表现多种多样。 【检验方法的局限性】 该试剂盒只提供抗核抗体（ANA）的检测结果，具体病情及诊断应由临床医生结合临床表现和其他信息综合判断。【产品性能指标】 阳性符合率：从室内阳性质控品P1-P30（共计30份阳性血清标本）中随机抽取10 支用