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分 全自动生化分析仪 基础知识基础知识 郑振寰 全自动生化仪分析原理 全自动生化仪分析原理 • 吸收光谱法吸收光谱法：郎伯郎伯‐比尔定律比尔定律 • 比浊法： 郎伯-比尔定律 郎伯-比尔定律 A = lg（I /I）＝KCL 0 I ＝I ×10-KCL I ＝I ×10 0 0 I ：入射光强度 0 II：：透过光强度透过光强度 K：常数 C：溶液浓度 L：溶液的厚度 当一束平行单色光照射有色溶液时，光的一部分被吸收，另一部分透过溶液，有色溶液的吸光度与其浓 度成正比（常数和光径不变），延伸为入射光强度与透射光强度比的对数。 郎伯-比尔定律偏离因素 郎伯-比尔定律偏离因素 11、非单色光引起的误差非单色光引起的误差： 复合光引起的偏离：由于理想的单色光很难得到，多为波长很窄的复合光。复合光可产生正负偏离； 杂光引起的偏离：机内光元件的散射造成的； 狭缝宽度的影响：狭缝越小，光色越纯，吸光度增高，但辐射能较少。 狭缝宽度的影响：狭缝越小，光色越纯，吸光度增高，但辐射能较少。 对定性分析，狭缝尽可能的小—提高分辨率； 对定量分析，狭缝尽可能的大—灵敏度范围内； 前后狭缝相同误差最小。 2、非吸收作用引起的误差： 散射效应：溶液浑浊会产生散射效应，散射光与透射光一同被接收； 荧光效应： 33、测量过程误差测量过程误差： 化学反应产生的误差：表观浓度与真实浓度存在一定的误差，目前通过 在相同条件下测试标准液来弥补； 认为误差：方法和时间不当；反应杯清洗不当，温度的影响。 认为误差：方法和时间不当；反应杯清洗不当，温度的影响。 JIS （日本工业标准）反应杯洗涤方法： 1、Na2CO3 （20g/l ）+少量阴离子表面活性剂；（碳酸钠） 22、HNOHNO (1:5)+(1:5)+少量的少量的HH OO ； （（硝酸硝酸，双氧水双氧水）） 3 2 2 洗涤方法：先1后2再水。 ASTM （美国材料试验标准）反应杯洗涤方法：HCl:H2O:CHOH=1：3：4 （盐酸：水：甲醇） 免疫比浊法 免疫比浊法 抗体抗体 （（AbAb ））与可溶性抗原与可溶性抗原 （（AAg ））反应反应，形成形成一定结构的免疫复合物定结构的免疫复合物，成为悬浮于反应溶液中的微粒成为悬浮于反应溶液中的微粒。在在 沉淀反应中形成的复合物微粒具有特殊的光学性质，可用仪器检测，提高了方法的速度、灵敏度和易操 作性。 1．透射比浊测定法：是测定入射光强度由于溶液中粒子的散射而降低的程度，它并不直接测定散射的光 强 这 点与分光光度测定法极为类似 用这种方法时 多用聚乙二醇 （PEG）作为反应增强剂 这种非 强。这一点与分光光度测定法极为类似。用这种方法时，多用聚乙二醇 （PEG）作为反应增强剂。这种非 离子型聚合物可以降低抗原抗体复合物的溶解度。 2．散射比浊测定法：是直接测定溶液中微粒所散射的光强。散射比浊法也已经用于自动分析仪器中。 免疫浊度测定中应注意的问题： （（11））伪浊度的影响伪浊度的影响。 非特异的交叉反应 增浊剂浓度 反应时间 样品本身的浊度样品本身的浊度 试剂的污染和变质 器材不够清洁 (2)钩状效应（hook effect ）的影响。当Ag和Ab浓度比例不当时，不能有效地形成免疫复合物，产生弱阳性 甚至假阴性结果甚至假阴性结果。 (3)严格的室内质控是极必要的。 (4)标准曲线的制作. 光度计单元 光度计单元 被测溶液颜色 波长(nm) 颜色