泥鳅雄核发育纯合二倍体的产生米.PDF

维普资讯 第 11卷 第3期 水 生 生 物 学 报 V01．11，No．3 1987年 9月 ACTA HYDRoBIoLoGICA SINICA Sept．，1987 泥鳅雄核发育纯合二倍体的产生米 刘汉勤 易泳兰 陈宏溪 (中国科学院水生生物研究所，武汉) 提 要 以机械方法挑去泥鳅 (Misgurnusanguillicaudatus)()×大鳞副泥鳅 (Paramisgurnu~ dabryauus)()属间杂交受精卵的雌核，得到泥鳅雄核发育单倍体胚胎。将这种单倍体胚 胎的囊胚细胞核移植到大鳞副泥鳅去核卵中，获得了243个原肠胚胎，其染色体鉴定表明， 29．6％的核移植体的染色体发生了加倍。 在另一实验组中，从769个核移植卵得到了5尾 2cm以上的个体。尾鳍染色体鉴定、肌肉LDH同工酶电泳和形态鉴别表明，这5尾核移植体 为泥鳅雄核发育纯合二倍体。 关键词 雄核发育单倍体，细胞核移植，染色体加倍，雄核发育纯合二倍体，性决定。 人工诱导雌核或雄核发育，然后通过染色体的加倍得到纯合二倍体，对于鱼类的遗传 育种工作具有重要的意义。它既能纯化优良品种，又能大量提供选种的原始材料，还是生 产单性鱼的有效途径。从50年代至今，人工产生鱼类雌核发育工作已在几十种鱼类获得 了成功。目前，在鱼类广泛采用的方法是：以遗传物质失活的精子激活鱼卵，得到雌核发 育单倍体。用冷休克、热休克或静水压等方法处理卵子，抑制第二极体的排出，产生雌核发 育二倍体。然而，由于在第一次减数分裂中染色体的交换，由此得到的二倍体并不是完全 纯合的。Streisinger等用物理方法阻断雌核发育卵子的第一次有丝分裂，获得了大量的 纯合二倍体的斑马缶 【¨。是成功地获得鱼类纯合二倍体的唯一报道。Porter以机械方法 挑去蛙受精卵的雌核，得到了雄核发育单倍体胚胎Ⅱo]。Subtelny将蛙雄核发育单倍体胚 胎细胞的核移植到去核卵中，染色体自行加倍而产生了纯合二倍体的幼体Ⅱ。Parsons等 以辐射使雌核失去活性产生了鱼类雄核发育单倍体胚胎眇。我们以泥鳅为材料，借鉴两 栖类的方法，成功地获得了泥鳅雄核发育纯合二倍体的成鱼。 本文报道实验的部分结 果。 材 料 与 方 法 实验材料 泥鳅和大鳞副泥鳅来自武汉和广州，其染色体数目参考武汉大学细胞生 物学实验室的实验结果Ⅱ。根据我们的工作经验鉴别形态。根据胸鳍的形状鉴别雌雄。 ‘工作中得到陈敏容、杨兴棋、陈景新、阎康、邓初夏和聂光风等同志的帮助，在此表示衷心的感谢。 1986年5月19日收到。 维普资讯 242 水 生 生 物 学 报 雄核发育单倍体的产生 参照Porter的方法，在水温18—21℃条件下，泥鳅精子与 大鳞副泥鳅卵受精后7一l5分钟内挑去雌核，得到具有泥鳅雄核，大鳞副泥鳅卵质的单倍 体胚胎。 细胞核移植 按鱼类细胞核移植方法啪。将泥鳅雄核发育单倍体囊胚细胞的核移植 到大鳞副泥鳅去核卵中，由此发育成雄核单倍体或纯合二倍体。将泥鳅( )×大鳞副泥 鳅 (早)的杂交囊胚细胞的核移入去核的大鳞副泥鳅卵中，由此得到的核移植体作为对 照。 核移植体的检查及鉴定 原肠期胚胎细胞用秋水仙素处理后，按常规气干法制片，检 查其染色体的数目。 对仔鱼或成鱼则根据我们的方法 (待发表)，将尾鳍细胞放入添加 20％小牛血清的TC199培养液中培养6—7天，然后以气干法制片，检查其染色体。成 鱼肌肉乳酸脱氢酶 (LDH)同工酶电泳按常规淀粉凝胶垂直平板方法进行。 结 果 两组单倍体细胞核移植体和杂交细胞核移植体的发育见表1。第一组中的243个原 肠胚胎来自11批核移植卵。对它们进行单个胚胎染色体制片检查