分解尿素的细菌参考.pptVIP

?5.数据分析 ? 统计的菌落数往往比活菌的实际数目 。 因为当 细胞连在一起时，平板上观察到的 。 因此，统计结果一般用 而不是用活菌数来表示。 ?低 ?两个或多个 ?只是一个菌落 ?稀释涂布平板法 ?菌落数 ?阅读与思考：实例：教材P23 ?可能的原因： （1）培养基被杂菌污染或者培养基中混入了其他含氮物质； （2）所选用的土壤样品不同。 ?导致A同学与其他同学结果不同的可能原因有哪些？ ?讨论：如何设计实验，验证上述可能的原因？ ?小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。 ?方案一：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照。 ?方案二：其他同学用与A同学相同土样进行实验 ?结果预测： ①如果结果与A同学一致，则证明A同学无误； ②如果结果不同，则证明A同学的操作或培养基的配制有问题。 ?结果预测： ①如果有菌落出现，则说明培养基被杂菌污染； ②如果没有菌落出现，则说明培养基没有被杂菌污染。 ? 设置对照的主要目的是排除实验组中 对实验结果的影响，提高实验结果的 。 ?（三）.设置对照： ?非测试因素 ?可信度 ? 对照实验是指：除了被测试的条件外，其他条件都相同的实验，其作用是比照实验组，排除任何其他可能原因的干扰，证明确实是所测试的条件引起的相应结果。 ? 设置对照的方法：详见练习册P19 ①空白对照；②条件对照； ③自身对照；④相互对照 ?二、实验设计 ?实验设计的内容：包括对实验方案、仪器、材料、用具和药品，具体的实验步骤及时间安排等的综合考虑和安排。 实验设计的要求：周密细致。 ?土壤取样→制备培养基→样品稀释、取样涂布→微生物的培养与观察→细菌的计数 ?实验流程： ?实验操作 练习册P20 ?（1）土壤取样： 从肥沃、湿润的土壤中取样。细菌在酸碱度接近中性的潮湿土壤中生长，绝大多数分布在距离地表约3-8cm的土壤层。 先铲去表层土3cm左右，再取样。将样品装入事先准备好的信封中。 ?注意事项： 无菌操作：铁铲和信封都要灭菌。后面称取土壤、将称好的土样倒入锥形瓶、稀释土壤溶液，每一步都要在火焰旁操作。 ?（2）制备培养基： 制备牛肉膏蛋白胨培养基和以尿素为唯一氮源的选择培养基。 ? 牛肉膏蛋白胨培养基可作为对照，判断选择培养基是否起到了选择作用。 ?（3）样品稀释： 将10g土样加入盛有90ml无菌生理盐水的锥形瓶中，充分摇匀，吸取上清液1ml，转移至盛有9ml生理盐水的无菌大试管中，依次等比稀释至107稀释度。 ?（4）取样涂布 按照由107～103稀释度的顺序分别吸取 ml菌液涂布平板，按照浓度从低到高的顺序涂布平板，然后将平板置于30-37℃培养箱内培养。 ?0.1 ? （5）培养和观察 每隔24h比较一次牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基菌落的数量、形态等，并做好记录。 一般来说，在一定培养条件下，同种微生物表现出稳定 ?注意事项： 做好标记：本实验使用的平板和试管比较多。为避免混淆，最好在使用前就做好标记。例如，在标记培养皿时，应注明培养基种类、培养日期以及平板上培养样品的稀释度等。 在进行系列稀释的时候，为避免试管相互混淆，可以将已经进行过稀释操作的试管，按稀释度递增的顺序，依次放置在试管架的另一行。这样，试管的位置就能清楚地表示出稀释进行到哪一步。 ?实验操作 ?（5）细菌的计数 当菌落数目稳定时，选取菌落数在30～300的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。 ?结果分析与评价 ?1、培养物中是否有杂菌污染 ? 对照的培养皿中无菌落生长，说明培养基未被杂菌污染。反之，则被杂菌污染。 ?三、原理 ? 在以尿素为唯一氮源的选择培养基中，只有 能分解尿素的细菌才能生长繁殖。 ? 利用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目。当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。其计算公式为： 每克样品中的菌株数=（C÷V）×M。其中，C代表某一稀释度下平板生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液体积（mL），M代表稀释倍数。 ?四、器材用具：略 ?五、操作步骤 ?1、土壤取样 ? 从肥沃、湿润、酸碱度接近中性的土壤中，用无菌小铁铲铲去表层土，迅速取土壤并装入无菌信封中密封。