土壤中分解尿素的细菌的分离与计数参考.pptVIP

五、操作提示 （一）无菌操作 3、在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火 焰旁操作。 2、应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称好的 土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞。 1、取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用 前都要灭菌。 五、操作提示 （二）做好标记 （三）制定计划 本实验使用的平板和试管比较多。为避免混淆，最好在使用前做好标记。例如，在标记培养皿时，应注明培养基种类、培养日期以及平板上培养样品的稀释度等。 对于耗时较长的生物实验，需要事先制定计划，以便提高工作效率，在操作时做到有条不紊。 六.结果分析与评价 对照组的培养基在培养过程中没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染。牛肉膏蛋白胨培养基的菌落数目明显大于选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些菌落。 （一）培养基是否有杂菌污染以及选择培养基是否筛选出一些菌落。 如果得到了2个或2个以上菌落数目在30～300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数 （二）样品的稀释操作是否成功 （三）重复组的结果是否一致 如果学生选取的是同一种土样，统计的结果应该接近。如果结果相差太远，要分析产生差异的原因。 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，初步鉴定该种细菌能够分解尿素。 七.课外延伸 本课题对能分解尿素的细菌进行了初步的筛选。但是，这只是分离纯化菌种的第一步。对分离的菌种作进一步的鉴定，还需要借助生物化学的方法。 （原理？） 2013·新课标全国卷Ⅱ 临床使用抗生素前，有时需要做细菌耐药实验。实验时，首先要从病人身上获取少量样本，然后按照一定的实验步骤操作，以确定某致病菌对不同抗生素的敏感性。 回答下列问题： (1)为了从样本中获取致病菌单菌落，可用 法或 法将样本接种于固体培养基表面，经过选择培养、鉴别等步骤获得。 (2)取该单菌落适当稀释，用___________法接种于固体培养基表面，在37 ℃培养箱中培养24 h，使其均匀生长，布满平板。 平板划线 稀释涂布平板 涂布 (3)为了检测该致病菌对于抗生素的敏感性，将分别含有A、B、C、D四种抗生素的滤纸片均匀置于该平板上的不同位置，培养一段时间后，含A的滤纸片周围出现透明圈，说明该致病菌对抗生素A________；含B的滤纸片周围没有出现透明圈，说明该致病菌对抗生素B________；含C的滤纸片周围的透明圈比含A的小，说明_______________________________；含D的滤纸片周围的透明圈也比含A的小，且透明圈中出现了一个菌落，在排除杂菌污染的情况下，此菌落很可能是抗生素D的________。 (4)根据上述实验结果，为达到抗菌目的，最好应选用抗生素________。 敏感 不敏感 该致病菌对C的敏感性比对A的弱 耐药菌 A 抗生素抗性检测，一般是在”一个长满同种菌的培养基“上等距接种数个浸有不同抗生素但浓度相同大小相同的纸片，根据每个纸片周围被抑制的菌群的大小（即所说的透明圈）来判断细菌的抗药能力。对某种抗生素抗性越弱，被抑制的面积越大（也就是“透明圈”越大）。 之后讲课本P22的最上面内容 * 讲完第1点后讲课本P22中间楷体字内容引出2、3、4、内容 讲完后讲P23楷体字部分 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 一、课题背景 1、尿素 CO(NH2)2 尿素是一种重要的农业氮肥。但尿素并不能直接被农作物吸收。只有当土壤中的细菌将尿素分解成氨之后，才能被植物利用。 2、细菌分解尿素的原理 土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶 CO(NH2)2 脲酶 + H2O + CO2 2NH3 二、课题目的 ①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 ②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌 三.研究思路 ㈠.筛选菌株 ㈡.统计菌落数目 ㈢.设置对照 1、实例： 启示：寻找目的菌株时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。 原因：因为热泉温度比较高，淘汰了绝大多数微生物只有Taq细菌被筛选出来。 DNA多聚酶链式反应（PCR）是一种在体外将少量DNA大量复制的技术，此项技术要求使用耐高温（930C）的DNA聚合酶，哪儿寻找呢？ ㈠.筛选菌株 美国微生物学家布鲁克于1966年在一个热泉中发现的。 2、实验室中微生物的筛选原理： 人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。 15.0g