CN107365847-CN201710667237-用于原位检测核酸的超灵敏方法.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 107365847 A (43)申请公布日 2017.11.21 (21)申请号 201710667237.9 (51)Int.Cl. C12Q 1/68(2006.01) (22)申请日 2011.10.21 (30)优先权数据 61/405,503 2010.10.21 US 61/412,276 2010.11.10 US (62)分案原申请数据 201180062037.1 2011.10.21 (71)申请人 领先细胞医疗诊断有限公司 地址 美国加利福尼亚州 (72)发明人 吴兴永　王晖瑜　苏楠　王力翀　 罗宇龄　 (74)专利代理机构 北京安信方达知识产权代理 有限公司 11262 代理人 郑霞 权利要求书4页 说明书15页 附图5页 (54)发明名称 用于原位检测核酸的超灵敏方法 (57)摘要 本文公开了基于 方法和常 规ISH信号放大方法的组合的用于原位检测一种 或多种目标核酸的方法。这种新方法产生了高信 号强度并同时保持了信号放大的低背景噪声。可 以一致地重复产生结果并且所述方法能够容易 地用于常规临床诊断使用。此外，本发明涉及用 于一种或多种目标核酸的灵敏检测的试剂盒，其 包含 测定和通用ISH信号放大 测定的组分。 A 7 4 8 5 6 3 7 0 1 N C CN 107365847 A 权　利　要　求　书 1/4页 1.检测至少一种目标核酸的方法，所述方法包括： (a)提供包含或怀疑包含所述目标核酸的样品； (b)提供能够杂交至所述目标核酸的至少一组两个或更多个捕获探针； (c)提供能够杂交至所述两个或更多个捕获探针的组的信号产生多聚体，其中所述信 号产生多聚体包含标记探针； (d)提供能够结合至所述标记探针的信号放大探针，其中所述信号放大探针包含标记 物，其中，所述信号放大探针包含：能够结合至所述标记探针的生物素分子，能够结合至所 述生物素分子的抗生物素蛋白/抗生蛋白链菌素分子，以及结合至辣根过氧化物酶(HRP)、 碱性磷酸酶(AP)或荧光团并且能够结合于所述抗生物素蛋白/抗生蛋白链菌素分子的另外 的生物素分子； (e)将所述目标核酸杂交至所述两个或更多个捕获探针的组； (f)将所述信号产生多聚体捕获至所述两个或更多个捕获探针的组并借此将所述信号 产生多聚体捕获至所述目标核酸； (g)将所述信号放大探针捕获至所述标记探针并借此将所述信号放大探针捕获至所述 信号产生多聚体；和 (h)检测所述标记物的存在、不存在或量。 2.检测至少一种目标核酸的方法，所述方法包括： (a)提供包含或怀疑包含所述目标核酸的样品； (b)提供能够杂交至所述目标核酸的至少一组两个或更多个捕获探针； (c)提供能够杂交至所述两个或更多个捕获探针的组的信号产生多聚体，其中所述信 号产生多聚体包含标记探针； (d)提供能够结合至所述标记探针的信号放大探针，其中所述信号放大探针包含标记 物，其中，所述信号放大探针包含：能够结合至所述标记探针的HRP、AP、二硝基苯基(DNP)或 荧光团分子，能够结合至所述HRP、AP、DNP或荧光团分子的一种或多种第