CN107383185-CN201710638162-一种高纯度牛血清白蛋白的提取方法.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 107383185 A (43)申请公布日 2017.11.24 (21)申请号 201710638162.1 (22)申请日 2017.07.31 (71)申请人 天津市正江现代生物技术有限公司 地址 300000 天津市北辰区经济开发区内 双原道12号 (72)发明人 陈燕　 (51)Int.Cl. C07K 14/765(2006.01) C07K 1/14(2006.01) C07K 1/18(2006.01) 权利要求书1页 说明书2页 (54)发明名称 一种高纯度牛血清白蛋白的提取方法 (57)摘要 本发明提供了一种高纯度牛血清白蛋白的 提取方法，其包括，离心分离牛血清溶液，加热提 取牛血清白蛋白，第一次透析纯化，第二次阴离 子交换层析纯化，最后进行脱盐浓缩，过滤除菌。 本发明工艺流程短，操作简单，生产效率高，且本 发明中无有机溶剂的使用，避免了蛋白发生聚集 或变性，同时可减少对环境的污染和生产过程中 的不安全因素，提高了产品纯度，使其能够广泛 地应用医疗、生化等领域。 A 5 8 1 3 8 3 7 0 1 N C CN 107383185 A 权　利　要　求　书 1/1页 1.一种高纯度牛血清白蛋白的提取方法，其特征在于：包括以下步骤： (1)取新鲜牛血，加入原血清体积10％抗凝剂，经检验检疫合格后，在4℃下2500rpm离 心10min，取上清于-20℃冷冻，取冷冻的血清，室温下充分融化后，10000rpm离心10min，取 上清即为牛血清； (2)取所述牛血清于反应釜中，加入生理盐水稀释，加入稳定剂，再加入1mol/L的盐酸 将溶液pH值调至5.1～5.2，水浴加热，使反应釜内溶液的温度保持在65～75℃，反应持续60 ～80min，过滤后，收集滤液； (3)取所述滤液，用0.02mol/L的Tris-HCl缓冲溶液于4℃透析，透析袋截留分子量为 20000； (4)取透析过后的组分液，使用阴离子交换层析进一步纯化，使用0.2mol/L浓度氯化钠 进行梯度洗脱； (5)收集洗脱组分，并且进行脱盐浓缩，浓缩后的洗脱液使用过滤器进行过滤除菌，过 滤孔径为0.1um； (6)将除菌过滤后的溶液进行冷冻干燥，即得到牛血清白蛋白冻干粉。 2.根据权利要求1所述的一种高纯度牛血清白蛋白的提取方法，其特征在于：步骤(1) 中所述抗凝剂为4％的柠檬酸钠溶液。 3.根据权利要求1所述的一种高纯度牛血清白蛋白的提取方法，其特征在于：所述步骤 (2)中生理盐水与牛血清的体积比为1:2。 4.根据权利要求1所述的一种高纯度牛血清白蛋白的提取方法，其特征在于：所述步骤 (2)中的稳定剂为软脂酸钠。 5.根据权利要求1所述的一种高纯度牛血清白蛋白的提取方法，其特征在于：所述步骤 (2)中稳定剂按每100ml牛血清中加入0.7g的量加入。 6.根据权利要求1所述的一种高纯度牛血清白蛋白的提取方法，其特征在于：所述步骤 (4)中阴离子交换层析的填料为DEAE—纤维素。 2 2 CN 107383185 A 说　明　书 1/2页 一种高纯度牛血清白蛋白的提取方法