CN107306936-CN201710230345-一种常温条件下保存运输干细胞的方法及其所使用的基质.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 107306936 A (43)申请公布日 2017.11.03 (21)申请号 201710230345.X (22)申请日 2017.04.10 (71)申请人 澳门大学 地址 中国澳门氹仔大学大马路 (72)发明人 徐仁和　蒋斌　燕丽　 (74)专利代理机构 重庆强大凯创专利代理事务 所(普通合伙) 50217 代理人 隋金艳 (51)Int.Cl. A01N 1/02(2006.01) 权利要求书2页 说明书7页 附图6页 (54)发明名称 一种常温条件下保存运输干细胞的方法及 其所使用的基质 (57)摘要 本发明提供一种在常温下对干细胞进行保 存和运输的方法，并提供用于保证其存活率和生 物活性能量基质。所述方法包括在三维悬浮条件 下利用干细胞自身特性将其团块化，使其自然降 低增支和代谢速率，可以在常温条件下保证其存 活率和生物活性长达7-10天。本发明方法简单可 靠，价格低廉，稳定高效，安全性高，可以大规模 的在常温条件下制备，保存，运输和使用干细胞， 无需任何温度维持设备、筛选和纯化步骤，即可 发挥干细胞的组织再生，免疫调节等生物功能， 直接用于干细胞生物和医疗科学研究，免疫性疾 A 病和等应用需求。 6 3 9 6 0 3 7 0 1 N C CN 107306936 A 权　利　要　求　书 1/2页 1.一种在常温条件下的干细胞保存和运输方法，其特征在于，所述方法包括以下四个 步骤； 步骤一，干细胞团块形成步骤，制备悬浮培养液，在悬浮培养条件下，使干细胞自发聚 集，形成团块； 步骤二，干细胞团块培养步骤，制备活性能量液体培养基质，将步骤一形成的干细胞团 块置于所述活性能量液体培养基质中形成干细胞团块制品； 步骤三，干细胞团块制品封装运输步骤，在常温条件将所述干细胞团块制品封装塑料 容器中以实现高密度大规模的运输； 步骤四,干细胞团块基质去除步骤，在干细胞团块制品运输到目的地后，通过消化法、 自然法或离心法去除活性能量液体培养基质，实现干细胞与所述活性能量液体培养基质的 分离。 2.根据权利要求1所述的干细胞保存和运输方法，其特征在于，在所述的干细胞团块形 成步骤，所述的干细胞团块形成采用U/V型超低吸附培养板或者悬滴法，根据不同的间充质 干细胞数目制备不同大小规格的细胞团块，形成干细胞均匀球体。 3.根据权利要求2所述的干细胞保存和运输方法，其特征在于所述的干细胞均匀球体 大小介于50微米－500微米。 4.根据权利要求2所述的干细胞保存和运输方法，其特征在于，在所述的干细胞团块形 成步骤，所述干细胞团块形成直接利用超低吸附培养板或者玻璃培养瓶形成，直接将干细 胞以高密度的条件下直接铺于板中或培养瓶中低速搅拌，使其自发形成大小不一的团块。 5.根据权利1要求所述的干细胞保存和运输方法，其特征在于，在所述的干细胞培养步 骤，所述的干细胞团块化通常需要在37度、5%二氧化碳和大于80%的湿度培养箱中培养24－ 48小时形成或在20-37度条件下自发形成。 6.根据权利要求1所述的干细胞保存和运输方法，其特征在于，在所述的干细胞保存步 骤，用于将干细胞团块保存的活性能量基质为液体基质添加增粘剂混合制成，所述的活性 能量基质的成分包括DMEM低糖培养基，20%血清替代物，1% 非必需氨基酸，5% L－谷氨酰 胺，所述的增粘剂为食用级添加剂。 7.根据权利要求6所述的干细胞保存和运输方法，其特征在于，所述的活性能量基质所 包含的增粘