CN107418930-CN201710786745-一种纯化与扩增人骨髓间充质干细胞的制备方法.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 107418930 A (43)申请公布日 2017.12.01 (21)申请号 201710786745.9 (22)申请日 2017.09.04 (71)申请人 上海莱馥医疗科技有限公司 地址 201114 上海市闵行区新骏环路138号 4幢5层501室 (72)发明人 李新峰　 (74)专利代理机构 上海泰能知识产权代理事务 所 31233 代理人 黄志达　魏峯 (51)Int.Cl. C12N 5/0775(2010.01) 权利要求书1页 说明书7页 附图1页 (54)发明名称 一种纯化与扩增人骨髓间充质干细胞的制 备方法 (57)摘要 本发明涉及一种纯化与扩增人骨髓间充质 干细胞的制备方法，包括：(1)采用基于抗体的负 向分选法收集间充质干细胞；(2)采用无血清培 养基扩增间充质干细胞。本发明优于常规的分离 方法，在安全性和扩增能力方面，本发明提供的 无血清培养基明显好于常规的有血清培养基，具 有良好的应用前景。 A 0 3 9 8 1 4 7 0 1 N C CN 107418930 A 权　利　要　求　书 1/1页 1.一种纯化与扩增人骨髓间充质干细胞的制备方法，包括： (1)采用基于抗体的负向分选法：在骨髓中加入抗体混合物使非目标细胞和红细胞交 联，经密度梯度离心，从血浆层下层收集间充质干细胞； (2)采用无血清培养基扩增间充质干细胞，其中，无血清培养基添加以下组分： 重组人胰岛素：1～10μg/ml； 重组人表皮生长因子：10～50ng/ml； 重组人碱性成纤维细胞生长因子：10～50ng/ml； 重组人转化生长因子-β：1～50ng/ml； 重组人血小板衍生生长因子-BB：10～50ng/ml； 氢化可的松：0.5～10μg/ml； 维生素C：10～100μg/ml； 还原型谷胱甘肽：1～5mM； 重组人转铁蛋白：0.5～10μg/ml； 乙醇胺：1～10μg/mL； L-谷氨酰胺：1～10mM； 辅酶A：1～50μg/ml； 重组人凝血酶：1～10U/ml； 庆大霉素：1～100μg/ml； 亚硒酸钠：1～100ng/ml。 2.根据权利要求1所述的一种纯化与扩增人骨髓间充质干细胞的制备方法，其特征在 于：在所述步骤(2)扩增间充质干细胞之前用1～10μg/mL的重组人纤连蛋白包被培养瓶。 3.根据权利要求2所述的一种纯化与扩增人骨髓间充质干细胞的制备方法，其特征在 于：所述培养瓶在4℃的条件下包被过夜。 4.根据权利要求1所述的一种纯化与扩增人骨髓间充质干细胞的制备方法，其特征在 于：所述步骤(2)中的无血清培养基为DMEM-F12。 5.根据权利要求1所述的一种纯化与扩增人骨髓间充质干细胞的制备方法，其特征在 TM 于：在所述步骤(2)扩增间充质干细胞之后细胞传代过程中使用TrypLE 消化细胞。 2 2 CN 107418930 A 说　明　书 1