环境生物技术520-污染物的生物毒性监测与评价研究方法司.ppt

* * 或中国地鼠卵细胞 * * * * * * * 模拟海水（6ppt） 25cm 10cm 实验体系结构示意图 土壤样品采集 2015年9月收割 2016年9月收割 植物生物量收割： 模拟农田生态系统 该系统模拟农田条件，无陆生动物。 纳什农业生态系统：为同时测定农药在土壤、植物、水溶液和空气中的残留而设计，采用0.75 m3的矩形玻璃室，可打入足够数量的空气，通过玻璃室模拟微风并能收集挥发的农药。 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 蓄积系数法（Cumulative Coefficient Method） 是分次给受试物后引起50%受试动物出现某种毒效应的总剂量，与一次给受试物后引起50%受试动物出现同一毒效应的剂量的比值 蓄积系数 K＝ （比值愈小，表示蓄积作用愈强） 生物半减期 生物半减期（T1/2）是指一种外来化合物在体内消除到原有浓度（或量）的一半所需要的时间。 生物半减期越长的物质，表示越不易由体内消除，其蓄积作用的可能性就越大。 T1/2 = 动物细胞模型法 采用动物细胞（如：非洲绿猴肾细胞）作为试验受体，通过细胞培养，观察含外源化学物质的培养基中细胞的生长情况（与对照相比较），从而确定化学物对细胞生长产生毒效应； 测试时间一般只需48h，而且重复性好、成本低、可较直接反应对人体的影响。 细胞水平检测： 5.6.3 生物的分子和细胞水平检测 分子水平检测1： 加合物的测定 DNA－加合物的测定 蛋白加合物的测定 eg：Hb—加合物 分子水平检测2： 酶活性的测定方法： 直接法： 指直接测定体液中酶的含量，该法技术要求较高； 间接法： 通过测定酶反应中底物的减少或产物的增加量来确定酶的活性，该方法目前使用广泛，但要求反应专一性较高，反应结果与过程方便观察。 酶活性的测定 一般代谢酶的活性测定 乙酰胆碱酯酶 腺三磷酶 解毒系统酶类诱导作用的检测 混合功能氧化酶的诱导作用 谷胱甘肽硫转移酶 抗氧化防御系统检测 过氧化氢酶 谷胱甘肽过氧化酶 基本概念 突变（Mutation）： 生物体的遗传物质发生了基因结构的变化。 基因突变（Gene Mutation ）和染色体畸变（Chromosome Mutation ） 基 因 突 变：只涉及染色体的某一部分的改变，不能用光学显微镜直接观察 染色体畸变：染色体的数目或结构发生改变，可用光学直接观察 （1）致突变试验 5.6.4 生物致突变、致畸和致癌效应检测 致突变作用（Mutagenesis）和致突变物（Mutagen） 致突变作用：某些物质引起生物体的遗传物质发生基因结构改变的作用 致 突 变 物：具有引起生物体的遗传物质发生基因结构变化的物质 致突变试验的目的 确定某种外来化合物（或环境污染物）对生物体是否具有致突变作用。 致突变试验方法 基因突变试验 例如Ames试验、哺乳动物体细胞突变株试验 染色体畸变试验 DNA损伤试验 Ames试验（沙门氏菌回复突变试验） Ames试验原理 利用一种营养缺陷型突变型菌株与受试物接触，若此化学物质具有致突变性，可使突变型微生物再发生回复突变，重新成为野生型微生物。 注释1：营养缺陷型突变型菌株：不具合成组氨酸的能力，不能在低营养的培养基上生长 注释2：野生型微生物： 鼠伤寒沙门氏菌/哺乳动物微粒体酶试验法 某些化学物质需经代谢活化才有致变作用，在测试系统中加入哺乳动物微粒体酶，从而弥补体外试验缺乏代谢活化系统之不足。 方法：在动物体外将待测物经肝微粒体酶系活化后，检测其所诱发的沙门氏菌回变菌落数。 突变率＝诱发回复突变菌落数 / 自发回复突变的菌落数（对照） 当突变率大于2.0时，为阳性结果。 Ames试验的应用 检测食品添加剂、化妆品等的致突变性，由此推测其致癌性； 检测水源水和饮用水的致突变性，探索较现行方法更加卫生安全的消毒措施； 检测城市污水和工业废水的致突变性，结合化学分析，追踪污染源，为研究防治对策提供依据； 检测土壤、污泥、工业废渣堆肥、废物灰烬的致突变性，以防止维系生命的土壤受致突变物污染后，通过农作物危害人类； 检测气态污染物的致突变性，防止污染物经由大气，通过呼吸对人体发生潜在危害； 研究化合物结构与致变性的关系，为合成对环境无潜在危害的新化合物提供理论依据； 还有用Ames试验筛选抗突变物，研究开发新的抗癌药 。。。。。。 原理：某种动物体细胞突变株缺乏利用嘌呤碱的酶，因此不能利用某些嘌呤碱类似物，但正常细胞可以利用。当培养液中存在有一些不常见的嘌呤碱类似物时，正常细胞可以将这些嘌呤类似物结合进DNA中，从而影响细胞生