CRISPRCas9介导的高产谷胱甘肽原养型酵母工程菌的构建.PDF

生 物 工 程 学 报 周文龙 等/CRISPR/Cas9 介导的高产谷胱甘肽原养型酵母工程菌的构建 1999 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn December 25, 2017, 33(12): 1999−2008 DOI: 10.13345/j.cjb.170064 ©2017 Chin J Biotech, All rights reserved ·生物技术与方法· CRISPR/Cas9 周文龙，唐亮，成凯，刘忞之，杨燕，王伟 / 100050 , , , . CRISPR/Cas9 . , 2017, 33(12): 1999–2008. Zhou WL, Tang L, Cheng K, et al. Construction of prototrophic glutathione-high-producing yeast strain mediated by CRISPR/Cas9. Chin J Biotech, 2017, 33(12): 1999–2008. 摘 要: 谷胱甘肽 (Glutathione ，GSH) 是具有多种生理功能的非蛋白质类巯基化合物，已广泛应用于药品、 食品等行业，且市场需求量逐年增加。遗传工程育种是提高细胞内 GSH 含量的重要策略，但在遗传操作过程 中使用到的营养缺陷型遗传标记可能会影响菌株的正常生长，且不利于高密度发酵的进行。为回复工程菌株的 营养缺陷型，利用 gRNA 转录表达框和靶基因同源 DNA 片段直接共转化酵母细胞，由细胞内表达的Ⅱ型 CRISPR/Cas9 (Clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPR)-Cas9) 介导的基因组编辑技术 将营养缺陷型GSH 工程菌株W303-1b/FGP 回复为原养型菌株。结果显示，与营养缺陷型菌株相比，原养型菌 株生长周期缩短，且可以利用简单的合成培养基进行培养，方便菌株的大规模培养。 : CRISPR/Cas9 ，谷胱甘肽，酿酒酵母，营养缺陷型 Received: February 23, 2017; Accepted : May 2, 2017 Supported by: CAMS Initiative for Innovative Medicine (No. 2016-I2M-3-012), the Peking Union Medical College (PUMC) Youth Fund (No. 3332016057). Corresponding author: Wei Wang. Tel/Fax: +86-10 E-mail: wwang@ (No. 2016-I2M-3-012) “” (No. 3332016057) 2017-8-24 /kcms/detail/11.1998.Q0943.001.html 2000 ISSN 1000-3061 CN 11-1998/Q Chin J Biotech December 25, 2017 Vol.33 No.12 Construction of prototrophic glutathione-high-producing yeast strain mediated by CRISPR/Cas9 Wenlong Zhou, Liang Tang, Kai Cheng, Minzhi Liu, Yan Yang, and Wei Wang State Key Laboratory of Bioactive Substance and Function of Natural Medi