CN107164534-CN201710549265-用于检测CDKN2B基因变异的试剂盒及CDKN2B基因变异率的定量检测方法.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 107164534 A (43)申请公布日 2017.09.15 (21)申请号 201710549265.0 (22)申请日 2017.07.07 (71)申请人 苏州西山中科实验动物有限公司 地址 215000 江苏省苏州市吴中区金庭镇 居山湾 (72)发明人 张海鹰　严杰　董文明　金嘉敏　 (74)专利代理机构 苏州谨和知识产权代理事务 所(特殊普通合伙) 32295 代理人 叶栋 (51)Int.Cl. C12Q 1/68(2006.01) C12N 15/11(2006.01) 权利要求书2页 说明书3页 (54)发明名称 用于检测CDKN2B基因变异的试剂盒及 CDKN2B基因变异率的定量检测方法 (57)摘要 本发明提供了一种CDKN2B基因变异率的定 量检测方法，具体的，本发明通过采用通过在一 个反应体系内完成CDKN2B表达水平和突变率两 个指标的检测，来定量检测CDKN2B的变异率，与 现有技术中常规定量PCR技术必须分为两步或更 多步骤，才能获得该基因的变异率相比，本发明 的技术方案，操作更简便，节省时间，花费更低， 数据更加具有可比性。 A 4 3 5 4 6 1 7 0 1 N C CN 107164534 A 权　利　要　求　书 1/2页 1.一种用于检测CDKN2B基因变异的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒用于CDKN2B基因 变异率的定量检测；其中，所述试剂盒包含一对靶基因特异性引物和两条不同荧光标记的 探针。 2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述一对靶基因特异性引物为突变区引 物和保守区引物，所述两条不同荧光标记的探针分别为FAM标记的非突变探针，和vic标记 的突变探针。 3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于， ①突变区引物和vic标记的突变探针的核苷酸序列分别为： 正向引物(Forward Primer)：CTTATGCAGTTCCTCACCAAAGTTT； 逆向引物(Reverse Primer)：GGATAGGAAGAGAACCGCAAGTT； vic标记的突变探针(Probe)：VIC-AGGCAACAAATCCA-NONE； ②保守区引物和FAM标记的非突变探针为如下产品： 试验代码(Assay  ID)为Hs1， 登记号(Catalog#)：4426961， ABI产品(ABI PRODUCT USA)。 4.一种CDKN2B基因变异率的定量检测检测方法，包括以下步骤： (1)提取CDKN2B基因组DNA作为模板； (2)向反应体系中加入PCR预混合液：权利要求1～3任一项所述的一对靶基因特异性引 物和两条不同荧光标记的探针和DNA模板进行定量PCR； (3)检测步骤(2)突变区和非突变区的荧光信号到达设定域值时所经历的循环数(CT 值)； (4)根据步骤(3)突变区和非突变区CT值计算变异系数，即变异系数(％)＝突变区CT 值/非突变区CT值x  100。 5.根据权利要求4所述方法，其中，步骤(1)DNA的提取采用DNeasy血液和组织试剂盒 (DNeasy BloodTissue Kit)，按照说明书指引提取血液或组织DNA，鉴定DNA浓度和质量，- 20℃存储备用。 6.根据权利要求4所述方法，其特征在于，步骤(2)向反应条件为i)、50℃，2分钟；ii)、 95℃，10