CN107164230-CN201710316889-一种SD大鼠感染人附红细胞体模型的构建方法.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 CN 107164230 A (43)申请公布日 2017.09.15 (21)申请号 201710316889.8 (22)申请日 2017.04.28 (71)申请人 内蒙古医科大学 地址 010110 内蒙古自治区呼和浩特市土 默特左旗金山经济开发区 (72)发明人 陈瑶　郝雷　白静　刘寰宇　柴珂　 刘志跃　邰秀珍　杨殿相　孙勤暖　 龚延萍　孙计桃　 (51)Int.Cl. C12N 1/02(2006.01) A01K 67/02(2006.01) C12R 1/35(2006.01) 权利要求书2页 说明书6页 附图2页 (54)发明名称 一种SD大鼠感染人附红细胞体模型的构建 方法 (57)摘要 本发明公开了一种SD大鼠感染人附红细胞 体模型的构建方法，该方法包括以下步骤：附红 细胞体感染率计算及感染情况分度；人附红细胞 体分离纯化；瑞氏染液配制；阿氏液配制；瑞士染 色；SD大鼠感染人附红细胞体模型的构建；体温 测量；临床症状观察；数据处理。本发明可以克服 小鼠血量少，不能满足实验过程反复测量某些指 标的弊端，具有操作方便的特点。 A 0 3 2 4 6 1 7 0 1 N C CN 107164230 A 权　利　要　求　书 1/2页 1.一种SD大鼠感染人附红细胞体模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤： 步骤1、附红细胞体感染率计算及感染情况分度 在血涂片的头、体、尾部各随机选取3个视野，每个视野计数200个红细胞，计数200个红 细胞中被附红体感染的红细胞的个数，被感染红细胞的总数与红细胞总数的比值再乘以百 分之百，即为该张血片的感染率，每张血片，重复计数三次，并取其平均值作为最终感染率， 其中感染划分为3个程度：低于30％为轻度感染，30％-60％为中度感染，高于60％为重度感 染； 步骤2、人附红细胞体分离纯化； 步骤3、瑞氏染液配制 (1)把瑞士染粉1.2g，加入研钵，研成粉末； (2)加入甘油80ml； (2)加入甲醇600ml，常温下放置3个月； 步骤4、瑞士缓冲液配置 (1)取1％磷酸二氢钾30ml，1％磷酸氢二钠20ml，加蒸馏水至1000ml. (2)调整其PH在6.4-6.8，121℃高压灭菌30min，封口放4℃冰箱备用； 步骤5、阿氏液配制 (1)取葡萄糖2.05g，氯化钠0.42g，柠檬酸钠0.80g，加蒸馏水至100ml； (2)将PH调至6.1，过滤后分装； (3)121高压灭菌30min，封口放4℃冰箱备用； 步骤6、瑞士染色 (1)感染的第1、3、5、7、9、11d上午8：30从大鼠尾静脉采血进行瑞士染色； (2)血涂片平置于染色架上，根据血膜大小滴加适量瑞氏染液，3～5滴，使其迅速盖满 血膜； (3)加染液一倍量的缓冲液，用洗耳球对准血涂片，使染液与缓冲液充分混合，染色 10min，以固定血片； (4)水洗30s，待自然干燥后，经油浸物镜光学显微镜检查计数其感染率并观察红细胞 大小、形态、颜色； 步骤7、SD大鼠感染人附红细胞体模型的构建 (1)将准备好的人附红细胞体分离纯化液经腹腔注射的方式进行接种； (2)模型组大鼠每只注射100ul分离纯化液，对照组大鼠每只腹腔注射100ul无菌生理 盐水注射液； 步骤8、体温测量 在实验期间的0、3、5