红色荧光蛋白的光谱多样性及体外分子进化-生物化学与生物物理进展.PDF

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2008, 35(10): 1112~ 1120 色荧光蛋白的光谱多样性及体外分子进化* 1, 2) 2) 2)** 晋宇 崔宗强 张先恩 1) 2) ( 华中科技大学生命科学与技术学院，武汉430074; 中国科学院武汉病毒研究所，病毒学国家重点实验室，武汉430071) 摘要 从珊瑚中来源的各种红色荧光蛋白(red fluorescent protein, RFP)经过一系列体外进化，其波谱范围覆盖了570 655 nm, 极大地丰富了细胞内或体内光学成像的荧光探针．简要阐述了来源于Discos oma sp ., Entacmaea q uadricolor, A nemonia s ulcata, Heteractis crisp a, A ctinia eq uina 5 种珊瑚的红色荧光蛋白的光学特征、结构、体外分子进化及其应用． 关键词 红色荧光蛋白，分子进化，光学性质 学科分类号 Q5, Q7 荧光蛋白作为分子标签，在分析生物技术和细 签．迄今所有的红色荧光蛋白都是从珊瑚纲下的类 胞内分子示踪方面具有广泛的应用．尤其是在细胞 珊瑚目或海葵目的不同种中分离进化而来．最初发 [6] 分子影像的应用方面，可以通过融合蛋白技术，将 现并报道的红色荧光蛋白通常采用Matz 等 的命 荧光蛋白融合到细胞内的某个靶标蛋白上，以标记 名原则，即用小写字母表示蛋白质来源的珊瑚种 和分析靶标蛋白在细胞内的定位、分布和运动以及 类，FP 表示荧光蛋白(fluorescent protein) ，紧接着 与其他细胞内分子的相互作用．目前已经出现了许 的数字表示荧光蛋白的发射波长．如drFP583，表 多基于荧光蛋白的细胞内蛋白质相互作用的动态分 示从Discosoma sp ．分离出来的荧光蛋白，最大发 析技术，如荧光共振能量转移技术(FRET)和双分 射波长为 583 nm ．eqFP578 [7] 和 eqFP611[8] 表示从 子荧光互补技术(BiFC)等，它们是当今细胞内分子 Entacmaea quadricolor 分离出来的荧光蛋白，最大 事件 “可视化”的主流技术． 发射波长分别为578 nm 和611 nm ．荧光蛋白的成 从水母(A equorea v ictoria) 中克隆的绿色荧光蛋 熟过程即发色团的形成过程．荧光蛋白表达后发生 白(GFP)[1]通过一系列体外突变进化，发展出荧光强 自体催化，将发色团的三个氨基酸环化氧化形成一 度更强(EGFP)，波长不同的各种突变体，如蓝色 个 共轭体系，进一步氧化增加一个酰基，形成 (EBFP)、青色(ECFP，Cerulean) 、黄色(EYFP， 成熟发色团．由于野生型的红色荧光蛋白成熟速度 [2 5] 较慢以及常以四聚体或二聚体形式出现且易于聚 Citrine)荧光蛋白 ．这些荧光蛋白已经广泛用于 蛋白质分子标记和细胞内分子示踪，极大地促进了 合，对细胞或组织具有一定的毒性，影响所标记蛋 生物学的研究，不 的是，这些荧光蛋白的发射光 白的功能，其应用受到限制．因此，体外分子进化 谱局限在440 529 nm ，激发和发射波长较短，能 技术便被用来对野生型红色荧光进行改造．改造的 激发细胞内的某些物质产生荧光，因此细胞内成像 目标包括：缩短成熟时 ；消除四聚化，发展单体 时背景较高． 红色荧光蛋白；改变发射波长，发