基因测序实验常见问题分析.pptVIP

三、基因分型时出现的问题 分析及解答：从图1可以看出，在样本的每个位点上都有两个或两个以上的目的峰，并且目的峰之间峰值很不均衡，这些都说明这是一个混合样本。等位基因间峰值不均衡是因为不同来源的模板浓度不同导致。如果样本实际上应该是单一来源的，则说明在DNA提取或扩增的过程中污染了其它的DNA，需重新提取DNA或扩增。 1. 有额外的杂峰，并且每个位点均有杂峰 2. 只在一个位点或几个位点出现了额外的杂峰 分析及解答：图中，D21位点明显污染了ladder，这可能是由于检测过程中污染了D21 ladder的片段 3.在个别位点出现的不同于目的峰的染料堆积峰 偶尔会在本实验室出现的染料堆积峰（vWA位点、D18位点附近） 4. 峰值过高 5. pull-up或pull-down峰 分析及解答：当峰值过高（大于4000rfu）或matrix校正不好时，都可能会观察到在某一颜色中出现由另一颜色的信号而拉起（pull-up）或减低（pull-down）的峰。如果峰值过高，可以在上样前先将PCR产物进行稀释，这样电泳时峰值就会下降，pull-up或pull-down峰就会减轻。如果峰值小于2000rfu还是出现pull-up或pull-down峰，则说明是matrix校正不好，需要重新进行校正。 6. 位点丢失 分析及解答：图中出现了明显的位点丢失现象，这是由模板量较低或模板已降