(精选)菌种的传代、保藏及菌液课件.ppt

枯草芽孢杆菌 形态特征： G＋直杆菌、多呈链状排列，有鞭毛、有芽胞，位于菌体中心或次极端，不小于菌体。 培养特性：为需氧或兼性厌氧，营养要求不高，在普通营养琼脂培养基上形成较大的圆形或不规则的、表面粗糙、可有皱褶、菌落下面可形成红色色素的灰白色菌落。在营养肉汤培养基中形成菌膜,很少混浊或不混浊。 分离培养：营养琼脂平板 血琼脂平板 枯草芽孢杆—琼脂平板的形态 枯草芽孢杆—显微镜下菌体形态 真菌的初步鉴定试验 标本直接检查—显微镜检查 真菌的分离培养 ⑴.酵母型菌落：是单细胞真菌的菌落。形态与一般细菌菌落相似，但较大些，菌落表面光滑、湿润、边缘整齐，有部分单细胞真菌可在培养基中形成假菌丝，此菌落称为类酵母型菌落。 ⑵.霉菌型菌落：是多细胞真菌的菌落。菌落成棉絮状、绒毛状、粉末状，并产生不同的色素。 快速显色鉴别培养法：经37℃1～2d就能显示结果。如白色念珠菌呈绿色或蓝绿色菌落，黑曲霉呈白色丝状菌落，里面呈淡粉红色，一周后逐渐变成黑色。 霉菌各种菌落形态 白色念珠菌 形态特征： G＋、圆形或卵圆形、着色不均匀、在玉米培养基中可产生假菌丝和厚膜孢子。 培养特性：在玫瑰红钠琼脂培养基上形成灰白色、表面光滑、带有浓重酵母气味的典型的类酵母菌落。培养稍久，菌落增大。在改良马丁培养基中呈沉淀生长。 分离培养：快速显色培养基 白色念珠菌—显色平板的形态 白色念珠菌—显微镜下菌体形态 黑曲霉 形态特征： 单层和双层瓶梗、孢子头球形放射状、褐至黑色、孢子梗无色至褐色。 培养特性：在玫瑰红钠琼脂培养基上形成菌落初为白色羊毛状 ，继而黑色或黑褐色，粗绒状。 分离培养：快速显色培养基 黑曲霉—显微镜下菌体形态 黑曲霉—电镜下菌体形态 菌种传代的工作环境、工具及其他器皿 环境 1、洁净工作室：环境洁净度10000级下的局部100级的单向流空气区域内，全过程必须无菌操作，防止微生物污染。 2、无菌隔离舱 工具 1、接种环 2、接种针 3、接种铲 4、接种钩 5、酒精灯及其他玻璃器械 培养所用器具 1、玻璃器皿：如各种规格培养皿。 2、微生物实验室常用的设备，如高压灭菌锅、恒温培养箱等 菌种的接种操作步骤 一. 斜面接种法： 1. 从冷藏箱中取出菌种斜面后，应在室温放置约30 分钟。 2. 将装有新鲜配制的培养基菌种保藏管管壁上注明 菌名及接种日期，和传代菌种一并移入接种室或 超净工作台。打开紫外灯照射一小时。 3.关闭紫外灯。点燃酒精灯，左手握住菌种斜面，将 管口靠近火焰上方，右手拿接种棒后端，将接种环 烧红约30秒，随后将接种棒金属部分在火焰上烧 灼，往返通过三次。 4.右手用无名指、小指及掌部夹住管塞，左手将管口 在火焰上旋转烧灼，右手再轻轻拔开管塞，将接种 环伸入管内先在近壁的琼脂斜面上靠一下，稍冷后 再至菌苔上，刮取少量菌苔，随即取出接种棒并将 菌种管口移至火焰上方。　 5.塞上管塞，左手将菌种管放下，取营养琼 脂斜面（或改良马丁琼脂斜面）一支，照上述操作打开管塞，将接种环伸入管内至琼脂斜面的底部向上划一条直线，然后从底部向上作连续曲线划线，一直划到斜面顶端，使细菌接种在斜面的表面上。 6.取出接种环，在火焰上方将培养基管盖上塞子，然后将接种过细菌的接种环在火焰上烧灼灭菌。 7.将已接种好的细菌管置35～37℃细菌培养箱培养22 ～24h，霉菌管置23～28℃霉菌培养箱培养7天。 二. 穿刺接种法： 用接种针取细菌少许，从培养基的中央垂直刺入，接近管底但不接触管底，然后接种针沿穿刺线原路退出。 主要用于生孢梭菌的传代。 三.液体接种法： 用接种针取菌少许，在试管内壁与液面交 界处的管壁上轻轻研磨，使菌混合于培养液中。 黑曲霉接种方法： 黑曲霉孢子悬液，可以保存在4℃环境，并应在一个月内尽快完成转种操作。转种操作应在超净工作台（或相当此环境）中进行，关闭风机，靠近酒精灯，拧开瓶盖，用无菌吸管吹吸管内液体，取1～2滴滴在改良马丁琼脂斜面，用吸管涂布均匀，置23～28℃培养5～7日，培养斜面形态可参照下图。 如上图，斜面正面为黑褐色厚绒状，色泽均一，不应有杂色；斜面侧面无色，接近菌层培养基略带黄色。 转种完毕的冻存管和使用过的器具应经121℃湿热灭菌30分钟再作处理。 菌种的保藏 菌种是重要的生物资源，研究和选择良好的菌种保藏方法具有重要的意义。 一、菌种保藏的目的 菌种保藏的重要意义就在于尽可能保持其原有性状和活力的稳定，确保菌种不死亡、不变异、不被污染，以达到便于研究、 二、菌种保藏的原理 首先应该挑选典型菌种的优良纯种来进行