人4-羟基壬烯酸(HNE)ELISA试剂盒说明书.doc

人4-羟基壬烯酸（HNE）酶联免疫ELISA） 试剂盒使用说明书本试剂仅供研究使用4-羟基壬烯酸（HNE）实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定中4-羟基壬烯酸（HNE）水平。用纯化的4-羟基壬烯酸（HNE)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入4-羟基壬烯酸（HNE）4-羟基壬烯酸（HNE），经过彻底洗涤后底物TMB显色。TMB在酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的4-羟基壬烯酸（HNE）呈正相关。用酶标仪在nm波长下测定吸光度（OD值），计算样品4-羟基壬烯酸（HNE）浓度。-20℃保存，但应避免反复冻融μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从第一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为12ng/L，8ng/L ，4ng/L，2ng/L， 1ng/L）。 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻混匀分钟甩干μl，空白孔除外。μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应。450nm波长依序测量各孔的度（OD值）浓洗涤液会有析出，稀释时可在水浴中加温助溶乘以计算以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以；或用标准物的浓度与OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以，即为样品的实际浓度。检测范围： 0.625 ng/ml-40 ng/ml 灵敏度： 0.156 ng/ml ；2-8。 1