0305高效液相色谱仪操作规程.doc

药业有限公司GMP管理文件 题 目 高效液相色谱仪操作规程 编 码： SOP-SB-0305-00 共 3 页 制 定 审 核 批 准 制定日期 审核日期 批准日期 颁发部门 办公室 颁发数量 生效日期 分发单位 办公室、质量部 一、目 的：制定高效液相色谱仪操作规程，便于操作者正确操作。 二、适用范围：适用于高效液相色谱仪的操作。 三、责 任 者：质量部经理、高效液相色谱仪的操作人员。 四、正 文： 准备： 流动相的制备：用高纯度的试剂配流动相，对规定pH值的流动相，应使用精密pH计进行调节，配制好的流动相应通过0.45μm的滤膜过滤，用前脱气。应配制足量的流动相及时待用。 供试溶液的配制，供试品用规定溶剂配制成供试溶液，定量测定时，对照品溶液和样品供试溶液均应分别配制2份，代试溶液在注入色谱仪前。要用0.45μm 的滤膜过滤。以免对色谱系统产生污染。 检查上次使用记录和仪器状态，检查色谱柱是否适用于本次试验，原保存溶液与现用流动相能否互溶。流动相的pH值与该色谱柱是否相适应，仪器是否完好。 操作： 启动泵，打开泵的排放阀，用冲洗键PURGE进行冲泵排气，泵排气自动停止后，关闭排放阀。 将流速调节至分析用流速，对色谱柱进行平衡，同时观察压力指示稳定，用干燥滤纸片的边缘检查柱管各连接处应无渗漏。 同时开启检测器电源开关，根据检品的需要，设定检测波长。 开启色谱处理机，设定裹减、纸速、记录时间，最小峰面积等参数。 进行检测器回零操作，检查处理机的电平（LEVEL），应符合要求，或检查记录仪的笔应处在设定位置。 待基线稳定后，进行处理机修斜率测试，符合要求后进行样操作。 进样时，把进样器手柄放在载样位置（LOAD）。如用定量环（LOOP）载样，则注射器抽取量应不少于定量环容积的5倍，用微量注射器定容进样时，进样量不得多于环容积的50%，在排气泡后方能向进样器中注入供试溶液。注入供试溶液时，把注射器的平头中直插至进样器底部，进样后，把受柄转至注样位置（INJECT），定量环内供试溶液即被流动相带入流路，取下注射器。 数据处理立即采取和处理色谱信息，记录色谱，当最后一峰出完后，应继续走一段基线，确认无主峰流出，方能结束记录。 根据第一张预测的色谱图，适当调整各有关参数，使色谱峰信号在色谱图上有一定强度。 含量测定的对照溶液和样品供试溶液每份至少注样2次，相对偏差不大于1.5%。 色谱系统适用性试验应符合中国兽药典的要求，如按指定峰计算的理论板数（n）和拖尾因子（T），分离度（R）以及重复性。 计算公式： （1） 其中：tR—为保留时间；Wh/2—为半高峰宽，取相同位置。 （2） 其中：W0.05h—为基线5%峰高处的峰宽；d1—为峰上升边离5%峰高处的距离。 （3） 其中：tR1和tR2分别为相邻前后二峰的保留时间；W1和W2分别为其峰的底宽，t和W取相同单位；Wh/2为峰1，2的半高峰宽。 （4）重复性，取各品种项下对照品溶液，连续进样5次，除另有规定外，其峰面积测定值的相对标准差应不大于2.0%。也可按各品种校正因子项下。配制相当于80%、100%、120%的对照溶液，加入规定量的内标准溶液，配成三种不同浓度的溶液，分别进样3次，计算平均校正因子，其相对标准偏差也应大于2.0%。 洗机和关机： 3.1 分析完毕后，先关检测器和数据处理机，再用适当经滤过和脱气的溶剂清洗色谱系统，用分析流速冲洗，冲洗时间为30分钟，当酸度超过pH8时，应延长冲洗时间为1小时。 3.2 冲洗完毕后，逐步降低流速至零，关泵，进样器也应用相同溶剂冲洗。 3.3 关断电源，作好使用登记，内容包括日期、检品、色谱柱流动柱、使用小时，仪器完好状态等。 注意事项： 4.1 色谱柱与进样器及其出口端与检测器之间无渗漏连接。 4.2 新柱或被污染柱用适当溶剂冲洗时，应将其出口端与检测器脱开，避免污染。 4.3 以硅胶作载体的化学键合相填充剂的稳定性受流动相pH值的影响，使3用时，pH范围为（2～10）。 4.4 色谱柱的使用应登记，以方便选择和更。 4.5 用过含盐流动相的，更注意先用水，再用甲醇-水充分冲洗。 3-1