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荧光蛋白技术的研究进展生命奥秘
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表4 肿瘤成像的定量 表5 大肠中GFP标记的肿瘤全身成像与活体内成像的比较
肿瘤部位 像素 mm2 肿瘤大小
成像类型 荧光强度
(像素)
GFP 脑部 9 12 6.00
RFP 脑部 811 5.34 全身成像 2465 137
GFP 骨 356 1 23.42 剖开后成像 273 1 196
GFP 大肠
2465 16.22
(全身成像) 资料来源:BioTechniq ues
GFP 大肠
273 1 17.97
(活体内成像)
GFP 胰腺 2813 18.51
RFP 肝脏 2254 14 .83
RFP 胰腺 25103 165.15
资料来源:BioTechniq ues
以上表明,在动物体内用GFP或RFP等标记的肿瘤能够发射出很强的信号,获得的图像可以很容易定
量,自发荧光的干扰可以忽略,并且可以用简单的低成本的设备进行GFP和RFP的全身成像。
所有这些表明,荧光蛋白在肿瘤研究及体内高通量药物筛选等其它方面有广阔的应用前景。
参考文献
1. Anna-Katerina Hadj antonakis, Andras Nagy. (200 1) The color of mice: in the light of GFP-variant reporters, Histochem Cell Biol , 115:49-58.
2 . 刘忠华, 宋军, 王振坤等. (2008) 体细胞核移植生产绿色荧光蛋白转基因猪,科学通报, 53(5): 556-560.
3. Meng Yang, George Luiken, Eugene Baranov, et al. (2005) Facile whole-body imaging of internal fluorescent tumors in mice with an LED
flashlight, BioTechniq ues , 39: 170- 172 .
三、 荧光蛋白技术的最新研究进展
1. 新增荧光蛋白
在过去几年发展起来的荧光蛋白变体的荧光激发谱几乎覆盖了整个可见光的光谱范围。发色团周围环境
的变化,如带电氨基酸残基的位置、氢键网络及蛋白间疏水作用等可能产生蓝色或红色光谱漂移,经吸收和
激发后最大可漂移40nm。更大的光谱漂移会产生新的光谱型荧光蛋白,如CFP、GFP、Y FP等,这是由于发
色团共价结构和外部轨道连接的不同 (图20 、2 1)。人们进一步研究荧光蛋白发色团的复杂特性,找到了关
于多肽骨架结构与功能关系的线索,因此借助基因工程更精细的调整颜色变体,并扩大有用蛋白的光谱范围
就变得更加容易了。
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