(精编)DNA分型技术原理教学课件.pptVIP

DNA分型的步骤 提取DNA PCR扩增 毛细管电泳 数据处理 一、DNA 提取 应用聚合酶链反应（PCR）技术测定临床标本中的病原体核酸成分，是一种高度敏感，且最为直接的检测手段。由于临床标本中含有蛋白质、脂类等物质，可干扰PCR反应，故在做PCR反应前必须进行核酸提取。 临床常见的标本有血清（浆）、全血、分泌物、棉拭子、脓液、体液、新鲜组织、石蜡切片等，这些临床标本的处理和保存方法各有不同。 DNA提取的方法 样本 Chelex法 酚/氯仿 磁珠 硅胶膜 FTA卡 Chelex方法 1.Chelex-100提取DNA Chelex是一种以亚氨二乙酸为吸附因子的苯乙烯与二乙基苯的共聚物，对多价金属离子有螯合作用，可防止DNA在煮沸加热前被降解，同时在高温低离子强度下还有催化DNA释放的作用。这样既可减少DNA的损失，又可削除扩增中的一些抑制因素。 基本方法：沉淀细胞；5%试剂200μl；56℃0.5h以上；100℃8min；剧烈震 荡；离心上清。 注意： 离心彻底。 酚/氯仿法 原理： 通过酚-氯仿混合物萃取 DNA溶液中的蛋白质类有机物质，而保留 DNA 于水相溶液 中。 优点： 适用所有生物检材，提取 DNA 分子结 构完整，特别适合 RFLP、测序等需要大分子 DNA分析技术。 磁珠法 利用磁性硅胶吸附白细胞，用细