高中生物实验叶绿体中色素提取和分离方法的改进.docVIP

高中生物研究性学习 叶绿体中色素提取和分离 实验方法的改进 学 校：__________________________ 班 级：__________________________ 姓 名：__________________________  高中生物实验叶绿体中色素提取 和分离方法的改进 一、实验原理 叶绿体中的色素能够溶解在有机溶剂丙酮中，所以，可以通过研磨法用丙酮提取叶绿体中的色素(若无丙酮亦可用酒精代替)。层析液（在60℃～90℃下分馏出来20份石油醚 + 2份丙酮 + 1份苯）是一种脂溶性很强的有机溶剂。叶绿体中的色素在层析液中的溶解度不同(溶解度高的随层析液在滤纸上扩散得快，溶解度低的随层析液在滤纸上扩散得慢)，所以，可以用纸层析法分离出叶绿体中的色素。 二、材料用具 新鲜的绿色叶片(如菠菜叶片) 干燥的定性滤纸、烧杯(100mL)、研钵、小玻璃漏斗、尼龙布、毛细吸管、剪刀、小试管、培养皿盖、药勺、量筒(10mL)、天平 丙酮、层析液、二氧化硅、碳酸钙 三、方法步骤 1、取绿色叶片中的色素 1）称取5g左右的鲜叶，剪碎，放入研钵中。 2）加少许的石英砂（充分研磨）和碳酸钙 (防止研磨中色素被破坏)与10ml无水乙醇，快速研磨。 3）将研磨液倒入漏斗过滤，收集到试管中。 2、分离叶绿体中的色素 （1）制备滤纸条 （2）画滤液细线 （3）分离色素 3、观察和记录 在做叶绿体中色素提取和分离实验时常常会遇到一些问题，集中表现为以下两个方面：一是研磨绿叶提取色素操作完成前丙酮已挥干，为得到提取液不得不再次加人，即加大了丙酮的消耗量，又较长时间吸人丙酮蒸气影响健康；二是用玻璃毛细管划滤液细线断断续续，划不细划不齐，层析后叶绿素a、叶绿素b形成的两条色素带不直，分离不好，大大降低了实验的说服力。为解决上述问题，经过摸索对提取方法和划线工具稍加改进，效果好、操作简便、经济实用。 1 改进措施 1.1 提取方法的改进 将2g绿叶（如菠菜叶）剪碎放人研钵中，加少许二氧化硅、碳酸钙和无水硫酸钠（脱水），进行充分研磨。再加人丙酮，充分搅拌后把绿叶残渣拨到研钵内壁四周，尽量挤压，研磨液便会集中在底部凹陷处，将一脱脂棉球放于研磨液中，取一个医用5 ml玻璃注射器，将管内空气排空，针管口压紧棉球，抽吸研磨液，吸净后将注射器水平放置，以免滤液流出。 1.2 划滤液细线工具的改进 选7号医用不锈钢注射针头一个，用小砂轮磨平针尖并磨圆管壁外周，如堵塞可用随针头带的细钢丝通透，洗净干燥备用。将此针头安装在吸有滤液的注射器上，针头朝上排净针管、针头内空气，平放注射器，用滤纸吸去针尖周围多余滤液。划滤液细线时，将注射器直立或略倾斜，在裁好的滤纸条上，沿铅笔线迅速划一细线，再将注射器平放，等滤液细线干燥后重复2-3次。 2 分析讨论 （1）取2g绿叶提取色素即可满足实验需要，同时也节省丙酮。加人无水硫酸钠（脱水）能够降低滤液中水分含量，划线后滤液干燥快，不易扩散，这样才能做到划出的线条更细，色素更集中。先研磨后加丙酮提取，避免了研磨过程中再次加人，另一方面也降低了研磨过程中丙酮挥发造成的环境污染。 （2）选用注射器抽吸滤液，可使过滤速度更快，提取滤液更多，杂质更少，滤液直接收集保存在密闭针管中。省去了原实验需要过滤用的漏斗和收集用的试管，大致可折抵购买注射器的费用，比较经济实用。 （3）选用7号针头的原因：首先，其内径适中既不容易堵塞，划出的细线又能够满足要求。其次，它坚固耐用，虽然改制时稍显麻烦，但一次制作可永久回收利用，克服了毛细管因易折断而损耗的缺点，也节省了购玻璃管的费用，省略了毛细管制备操作。选用针头替代毛细管最大的优点还在于针头在改制时已将管壁外周磨圆滑，因而划线时更流畅，更容易划齐、划细，层析后叶绿素a、叶绿素b两条色素带分离更好，这一点是使用普通毛细管难以做到的。 （4）要想得到更细更齐的滤液细线，划线时“运笔”上确需掌握一点技巧，有以下两点需要注意：在“笔”中滤液体积超过1. 5 ml的情况下，划线时如果将“笔”直立，滤液下流速度较快，常形成微滴影响划线，克服方法要么将“笔”倾斜约45°角，要么划线时“掐头去尾”取滤液均匀的中间段；当“笔”中滤液体积在1 ml左右时，可以轻易地划出又齐又细的滤液细线。