医学免疫学课程综合性.docVIP

《医学免疫学》课程综合性、设计性实验开设计划 （免疫学教研室） 本教研室在顺利完成我学院下达的本科教学任务的同时，也在不断探索进行教学改革，通过使用新的教学手段、教学方法及加强课件的建设，使学生能更好地掌握本学科的专业知识。 我教研室为增加实验课中学生动手操作的内容，培养学生动手操作能力，同时在实验课教学中鼓励和培养学生的创造性思维的能力，拟计划对2004级临床医学、预防医学、检验、生物技术、儿科学、法医学、影像学、妇幼卫生、耳鼻喉学、护理学、麻醉学、心理学、肿瘤学、急救医学、口腔学、神经精神等本科各专业学生中开展综合性、设计性实验，现将实验方案安排如下： 实验设计方案： 一、中华猕猴桃多糖对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响 （一）研究目的 中华猕猴桃多糖（ACPS）是从中药材中华猕猴桃根中提取的多糖复合物[1]，本研究以巨噬细胞为例，观察ACPS对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响，探讨ACPS的免疫药理作用。 （二）技术路线 链球菌 链球菌 酵母菌腹腔 注射 酵母菌 ACPS实验组 （腹腔给药，共 ACPS实验组 （腹腔给药，共12天） 腹腔Mφ小鼠 第13天 腹腔注射 腹腔Mφ 小鼠 涂片镜检，计算吞噬百分率收集腹腔巨噬细胞 涂片镜检，计算吞噬百分率 生理盐水对照组 （三）实验方法 用适量链球菌等量注射小鼠腹腔[2]，即达到感染效果，又不致小鼠在15天内死亡。将小鼠随机分为试验组和对照组，每组10只。 试验组的小鼠31.0mg/kg每日腹腔给药（ACPS），共12天。末次给药后24小时，每只小鼠腹腔注射0.5ml酵母菌 （1×105 菌/ml）。30min后， 腹腔注射，RPMI—1640培养液（PH7.0）2ml，收集腹腔液，滴于盖玻片上，移至37℃培养箱30分钟，染色后油镜观察涂片，计算吞噬百分率。 对照组以生理盐水代替ACPS，其它步骤同实验组。 二、黄芪对人外周血T细胞增殖及NK活性的影响 （一）研究目的 通过观察黄芪（Astragalus membranaceus；AM）对PHA诱导的体外T细胞增殖和对NK细胞杀伤活性的影响，探讨AM是否对机体免疫有促进作用。 制备AM 制备AM 分离外周血PBMC 分离外周血PBMC PHA刺激 PHA刺激 外周血NK活性测定 外周血NK活性测定 （51Cr释放法测每样本cpm值） PHA+AM 实验组 PHA+1640培养液 对照组 检 测 T细胞增殖反应的影响 T细胞增殖反应的影响 （3H—TdR掺入法测每样本cpm值） （三）实验方法 AM的制备[3] 用黄芪饮片制成煎液 AM对T细胞增殖反应的影响：采用（采用3H—TdR掺入法[2]）： 随机抽取正常献血员静脉血抗凝常规法分离PBMC，以RPMI—1640培养液调浓度至1×106 /ml，加入96孔培养板中100?l/孔，加入AM（最适浓度为25?g/ml）和植物凝聚素(PHA，最适浓度为25?g/ml)，设计如下两组，每组均重复三孔。 PBMC+PHA（100?l）+1640培养液（100?l） （对照组） PBMC+PHA（100?l）+AM（100?l） （实验组） 37℃、5%CO2孵育56h后，每孔加3H—TdR 20ul。继续培养16h，测每样本cpm值，计算促进率 AM对NK活性的影响应（用51Cr释放法[2]）： 效应细胞来自献血员新鲜血液常规分离的淋巴细胞，提前用AM浓度5?g/ml，处理16h，用RPMI1640培养液调细胞浓度至1×106/ml 备用。靶细胞（K562）用51Cr标记，并温育45min后调细胞浓度1×105/ml备用。设计以下两组： 未经AM处理的效应细胞lml+靶细胞悬液0.1ml （对照组） AM处理过的效应细胞lml+靶细胞悬液0.1ml（实验组） 置37℃、5%CO2条件下培养4h后离心2500r/min，10min后，取上清液0.5ml。将上清液置r计数器中测定其放射性（cpm值） 三、灵芝多糖对小鼠免疫调节的研究 （一）研究目的 灵芝多糖（GLP）是一种从灵芝菌培养物的菌丝中提取的多糖，通过检测注入不同计量GLP后小鼠的淋巴细胞增殖反应及诱生IL—2的情况来说明不同剂量的GLP对免疫功能的不同影响。 实验对象（小鼠）技术路线 实验对象（小鼠） 动物 分组 动物 分组 正常对照组实验组（4个GLP浓度组） 腹腔注射不同剂量的GLP 腹腔注射生理盐水 正常对照组 实验组（4个GLP浓度组） 取脾细胞