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“畜牧微生物学” 实验 2009-2010-1 华中农业大学 动物科技学院－动物医学院 大实习 鲜乳的微生物学检验（1周） 一．目的 1. 对微生物学基本操作技能进行综合性操作训练。 2．了解实验方案的设计思路。 3．掌握鲜乳中含菌量的计数方法。 4．学习鲜乳的大肠菌群最近似数的测定方法。 ? 二．内容 1．鲜乳中含菌数的检验 2．大肠菌群最近似数（MPN）的测定 （一）原理 一个活菌可长成一个菌落，计算菌落数。 一. 鲜乳中含菌数的检验 （二）方法 稀释倾注平板计数法 total bacteria amount Plate counts and serial dilutions : * Pour plate method * Spread plate method （三）步骤 样品稀释 倾注平板 培养 计数 稀释倾注平板计数法示意图 注：因为是检测1ml水样中的细菌总数，故不论哪个稀释度，取到平皿中的样量是1ml。 10-1 10-2 10-3 10-4 1# 2# 1# 1# 2# 2# 2# 1# （四）稀释倾注平板计数法的结果记录及报告 二. 大肠菌群最近似数（MPN）的测定 什么叫大肠菌群？ 大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌。 其定义为：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。 （一）原理 大肠菌群数 100 g 100ml水中所含大肠杆菌群的最近似数（most probable number MPN） （二）方法 乳糖胆盐发酵法 　　蛋白胨　　　　　　　　　　20g　　猪胆盐(或牛、羊胆盐)　　　5g　　乳糖　　　　　　　　　　　10g　　0.04%溴甲酚紫水溶液　　　 25mL　　蒸馏水　　　　　　　　　　1000mL　　pH7.4 （三）步骤 初发酵试验 分离培养 复发酵试验 1.0ml 1.0ml 10-1 初发酵试验 复发酵试验 分离培养 （四）大肠菌群MPN测定结果记录及报告 大肠菌群MPN测定结果记录表 第一天实验内容： 材料及用具的准备 实验分组安排 实习报告一： 根据实习内容写出实验方案（第二天实验开始前提交）。 第二天实验内容： 1．鲜乳中含菌数的检验：样品稀释――倾注平板――培养 2．MPN的测定：鲜乳接种乳糖胆盐发酵管――培养 第三天实验内容： 鲜乳中含菌数的检验：菌落计数、记录数据、得出结果。 MPN的测定： （1）观察乳糖胆盐发酵管的发酵情况并记录产气结果。 （2）分离培养：将产气的发酵管分别转种到麦康凯琼脂平板上。 第四天实验内容： MPN的测定： 复发酵试验：挑取每个平板上的红色菌落1－2个进行G染色镜检并记录染色镜检结果，同时将同一菌落接种微量乳糖发酵管。 第五天实验内容： 1．MPN的测定： 观察微量乳糖发酵管产气情况，记录结果，得出最后结果。 2．总结：回顾整个实验过程，设计――准备――实施――得出结果――清理 3．清洗实验用具。 4. 完成实习报告。 实习报告二： 1．简述鲜乳中含菌数的检验方法并报告实验结果。 2．简述鲜乳的大肠菌群最近似数（MPN）的测定方法并报告测定结果。