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诊断酶学 泸医附院检验科 吴泽才 酶的临床应用简史 1908年，测定尿液中AMY用于急性胰腺炎的诊断； 30年代临床测定ALP用于骨骼疾病的诊断； 1954年，证实血清AST对心肌梗死和肝脏疾患有诊断价值； 60年代初，发现CK在诊断AMI方面更具特异性； 70年代初，发现CK-MB同工酶诊断AMI比CK特异性更高，一度被认为是“金标准”。 80年代以来，发现组织中同工酶进入体液后，有可能发生变化。如CK-MM可进一步分为CK-MM1、MM2、和MM3，CK-MB可分为MB1和MB2。在诊断AMI上优于总酶和同工酶。 本章主要内容 酶学基础知识 血清酶 酶的定量技术 同工酶及其亚型测定 临床常用血清酶、同工酶及其亚型 有关概念 酶促反应；由酶所催化的反应 酶活性(activity)：酶催化化学反应的能力 底物(substrate)：酶催化所作用的物质 产物(product)：酶促反应的生成物 酶的特异性(specificity)：酶对作用物的选择性 激活剂(activator)：加速酶促反应的物质 抑制剂(inhibitor)：减慢甚至终止酶促反应的物质 酶学基础知识 酶的分子结构与功能 酶促反应的特点与机理 酶促反应动力学 酶的命名与分类 一、酶的分子结构与功能 酶的本质：蛋白质、蛋白质+核酸、核酸。 二、酶促反应的特点与机理 （一）酶促反应的特点 极高的催化效率 高度的特异性 酶促反应的可调节性 （二）、酶促反应的机理 2、酶促反应的机理 三、酶促反应动力学 （一）、酶促反应 [S] [P] K2[E][S] Vmax[S] V = —— = —— = ———— = ——— dt dt Km + [S] Km + [S] 具体推导过程见生物化学教材 Vmax：最大反应速率 [S]：底物浓度 Km： 米氏常数 V：不同[S]时的反应速度 Km的意义 1.1/Km（Km值越小，亲和力越大） 2. Km值最小者为最适底物 3.V/Vmax=[S]/（Km+[S]），若Km和[S]已知，可计算二者比值；若二者比值已知，也可计算[S]为Km的多少倍 4.计算工具酶的用量（后面将作介绍） 5.鉴别酶或同工酶 6.推测反应方向及效率（向Km值小的方向反应） 7.寻找限速步骤（Km值最大者） Vmax的意义 Vmax 定义：一定酶量下的最大反应速率，即酶完全被底物饱和时的反应速度，与酶浓度呈正比。在酶的浓度不变时，对于特定底物而言，Vmax也是一个常数。 意义：Vmax=Kcat[E0] 如果酶的总浓度已知，可从Vmax计算酶的转换数Kcat，即单位时间内每个酶分子将底物转换成产物的最大值。Kcat越大，表示酶的催化效率越高。目前已知最高酶变率的酶是碳酸酐酶（36×106min-1）。 Km与Vmax的测定 1 Km + [S] Km 1 1 — = ———— = —— — + —— V Vmax[S] Vmax [S] Vmax 以1/V为纵坐标，1/[S]为横坐标作图可得一直线。纵轴截距为1/ Vmax，斜率为Km/Vmax，横轴截距为-1/ Km。 （三）、酶促反应的影响因素及反应条件的选择 1、底物的种类和浓度 2、酶浓度 当[S]?[E]时，V与[E]成正比； 若[E]很高，则S被过早过多消耗，影响测定，需将E作适当稀释。 3、缓冲液的种类、离子强度和pH 体液样品与底物混合后不一定维持原来的pH，会影响测定结果，应严格掌握样品与底物的用量比例，一般样品在总体积中的比例应不超过10%。 4、温度 5、激活剂与抑制剂 三、酶的命名、分类与编号 习惯命名法：据酶所催化的底物、反应的性质以及酶的来源等进行命名。如乳酸脱氢酶、丙氨酸氨基转移酶、胰蛋白酶。简单但不系统。 系统命名法：国际酶学委员会1961年提出，标明酶的底物与反应性质，底物名称之间以“：”分隔开，如L乳酸：NAD+氧化还原酶。正确合理但繁琐。 酶的分类：据酶所催化反应类型将酶分为氧化还原酶、转移酶、裂解酶、异构酶、合成酶。 血清酶 指存在于血清中而非血清特定产生的酶 一、血清酶的来源 血浆特异酶 血浆蛋白的固有成分，在血浆中发挥特定的催化作用。eg：凝血酶原、蛋白酶类的凝血因子、纤溶酶原、ChE、铜蓝蛋白、卵磷脂胆固醇酰基转移酶（LCAT）、脂蛋白酯酶等。大多数在肝脏合成，常作为肝功能试验的一部分。下降较有临床意义。 非血浆特异酶 在血浆中浓度低，且在血浆中很少发挥作用。 外分泌酶