肺结核患者外周血记忆性t细胞与il-17il-27水平相关性研究.docVIP

结核性胸膜炎患者胸水记忆性T细胞亚型表型的研究 贵州省遵义医学院附属医院 鄢仁晴1 赵兴容2 方宁3 赵建军4 罗军敏5 （1临床检验中 心，2实习生，3细胞工程室，4呼吸内科，5学院基础医学院，563003） 本文为贵州省卫生厅2009年度科学技术基金立项项目： 肺结核外周血记忆性T细胞，IL－17，IL－23及IL－27的免疫作用探讨，负责人：鄢仁晴，编号：gzwkj2009-1-069。Tel中图法分类号 R521.9 摘要：目的 通过检测结核患者CD4+和CD8+记忆T细胞亚型表型的表达，探讨性T细胞结核用流式细胞术检测结核患者CD4+和CD8+记忆性T细胞结核结核由结核分杆菌感染引起，免疫发病机制尚未完全阐明。）El Fenniri L等[5]以IFN-γ,IL-2,TNF-α,MIP-1作性T细胞1.1对象 患者组：收集例住院病人，经呼吸肺（内）科临床诊断WS 288-2008 肺结核诊断标准的结核。，1.2 标本收集：无菌操作取患者组及对照组6小时内测定。无菌操作取患者组清晨空腹静脉血5ml于EDTA-Na2抗凝管中，立即轻摇混匀，室温保存；6小时内测定。2．研究方法：CD4 -Percp、–APC；仪器：美国BD公司流式细胞分析仪。 2.2胸水单个核细胞的制样：胸水混匀，置于4℃冰箱中静置6-12小时，弃上清，留取10-20ml，用移液管将剩余液体移入刻度离心管中，300×g离心5min，弃上清；PBS液洗3次，300×g离心5min，弃上清，再加5mlPBS液，旋涡混匀器上混匀，于300目尼龙网过滤，300×g离心5min，弃上清，沉淀即为胸水单个核细胞。 2.3流式分析操作方法：用流式细胞术检测性T细胞：取100μl待检样本，分别加入CD4 Percp、标记，设相应的阴性同型对照，室温闭光反应30min，然后加2ml溶血剂，5min后离心去上清，再加0.5~1.0ml的PBS液洗涤2次，流式细胞仪检测，Cellquest软件分析数据，记录阳性细胞百分率，减去非特异对照值，样品在6h内检测完毕。 n CD4+ TEM（%） CD4+TCM（%） CD8+ TEM（%） CD8+TCM（%） 结核组 22 2.158 ±2.67* 8.067 ±10.271 1.017 ±2.169* 11.742±12.762 对照组 8 1.885 ±2.595* 17.741±16.807 0.511 ±0.625* 13.448±10.474 *TEM与TCM比较有显著差异(P0.05)。 表2结核性胸膜炎患者胸水和外周血记忆性T细胞亚型的表型（%）(x ±s) n CD4+ TEM（%） CD4+TCM（%） CD8+ TEM（%） CD8+TCM（%） 胸水 22 2.158 ±2.67* 8.067 ±10.271* 1.017 ±2.169 11.742±12.762* 外周血 22 13.212 ±8.342 46±20.145 1.265±0.774 36.542 ±23.675 *胸水与外周血比较有显著差异(P0.05)。 表3结核性胸膜炎患者胸水治疗前后记忆性T细胞亚型的表型比较（%）(x ±s) n CD4+ TEM（%） CD4+TCM（%） CD8+ TEM（%） CD8+TCM（%） 治疗前 8 1.048 ±0.775 3.803±3.226 1.581 ±2.154 3.873±3.327* 治疗后 7 1.705 ±1.332 10.27±7.319 0.343±0.351 12.02 ±7.044 *治疗前和治疗后比较有显著差异(P0.05)。 图1 两例肺结核患者流式细胞图设门图（CD4+） 4．讨论 结核性胸膜炎约占整个结核病人群的30%，且能够对结核分枝杆菌产生有效的免疫应答。结核性胸膜炎通常作为结核病免疫反应研究的模型，但关于人体的免疫记忆性的相关研究未见报道。 现有的研究显示，在适应性免疫应答过程中，大部分效应性T、B细胞发生凋亡，其中一部分分化为抗原特异的记忆细胞保存下来，在抗原的再次刺激下快速增殖，为机体提供免疫记忆保护。结核分枝杆菌属胞内寄生菌，以T细胞免疫为主。记