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高效液相色谱法测定金丹活血 明目丸中绿原酸含量 摘要：目的 建立金丹活血明目丸中绿原酸的含量测定方法，方法 采用HPLC法，色谱柱为C18（200mm×4.6mm，5μm）；柱温为25℃；流动相为乙晴–0.1％的磷酸溶液（：）；流速为ml/min;检测波长为nm；结果Abstract : Objective To establish a method to determine the content of chlorogenic acid in Jindan Huoxie Mingmu pill. Methods The determination was performed by HPLC using C18 column（200mm×4.6mm , 5μm）.Column temperature: 25℃, a mobile phase of CH3CN-0.1％H3PO4(10 :90).The UV detection wavelength was 327 nm and a flow rate of 1.0 ml/min. Results Chlorogenic acid was linear within the range of 0.0092～0.092mg/ml,with a correlation cofficient of 0.9999,the average recovery percentage was 99.45％ and RSD was 0.57％.Conclusion The method is accurate,simple,feasible,and can be used effectively for the quality control of Jindan Huoxie Mingmu pill. 金丹活血明目丸由金银花、丹参、茯苓、车钱子、牡丹皮、郁金、当归、柴胡、赤芍、 黄芩、桃仁、红花12味药组成，具有活血化瘀，清热利湿功效，明目的功效。主要用于治疗视网膜炎，视神经炎等症。为了更好地控制该制剂的质量，保证临床用药安全有效，故选择用高效液相色谱法测定该制剂中的主药金银花的有效成分绿原酸的含量。结果表明：该方法专属性强，结果稳定可靠。 1.仪器与试药 SP2000高效液相色谱仪，包括SPUV-1000检测器，CH25柱温箱，ANASTAR工作站等；绿原酸对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号：110753-200212）金丹活血明目丸（漯河市中医院制剂室 ）批号20070501；乙晴，甲醇为色谱纯； 水为超纯水，其他试剂均为色谱纯。 2.色谱条件与系统适用性 色谱柱为 Kromasil C18柱（ 200mm×4.6mm，5μm ）；柱温为25℃；流动相为乙晴–0.1％的磷酸溶液（：）；流速为 ml/min;检测波长为nm；进样量μL；理论塔板数按计算大于1200。结果与样品中其他成分的峰均分离良好（见图1、图2）精密称取对照品mg，置1ml的棕色量瓶中，加溶解摇匀并稀释刻度，作为对照品贮备液对照品、、ml、0.6 ml 、0.8ml、 1.0ml,分别置10ml棕色量瓶中，加甲醇测得峰面积）对照品））对照品加甲醇0，3，6，9，12hr测定，结果表明，测得的绿原酸峰面积为1221277，1206640，1209360，1202144，1202672，n=5，RSD为0.64％，表明该溶液在12hr内稳定。 8.阴性对照试验 按处方比例配制除金银花以外的其余药味的制剂作为阴性样品，按含量测定方法进行测定，结果见图谱，表明其它组分对测定无干扰。 1.对照品色谱图 2.供试品） 5.7344 5.7344 5.7431 5.7431 5.7431 5.8301 5.8301 5.8301 8.19 8.19 8.19 8.20 8.20 8.20 8.32 8.32 8.32 6.43 6.43 6.43 8.17 8.17 8.17 9.85 9.85 9.85 14.53 14.59 14.56 16.34 16.29 16.27 18.08 18.15 18.12 98.60 99.53 99.07 99.63 99.02 98.78 99.09 99.22 0.41 99.80 99.49 10. 样品测定 精密量取绿原酸对照品储备液0.2ml,置10ml棕色量瓶中，加50%的甲醇定容，即得对照品溶液，依照“3”项下的方法制备供试品溶液，每批取3份，按本文色谱条件进样，注入高效液项色谱仪，按外标法测定金丹活血明目丸的绿原酸的含量，结果见表2。 序号 批