王镜岩 生物化学 经典课件 16RNA合成 考研必备 学生物化学必备讲解材料.pptVIP

生物合成及其调控;一、DNA指导下RNA的合成;;(一) DNA指导的RNA聚合酶; 真核生物的RNA聚合酶?对α-鹅膏蕈碱不敏感，转录45S rRNA前体，经加工产生5.8S rRNA，18S rRNA 和28S rRNA； RNA聚合酶?对α-鹅膏蕈碱敏感，转录编码蛋白质的基因和大多数snRNA；RNA聚合酶? 对α-鹅膏蕈碱中等敏感，转录小RNA，包括tRNA，5S rRNA， snRNA和scRNA 。;;转录的步骤;真核生物RNA聚合酶?启动子的共有序列;真核生物RNA聚合酶?启动子与转录因子的相互作用;真核生物RNA聚合酶?前转录复合物;前起始复合物的结构。显示polⅡ, TATA box, TBP, TFⅡB(B) , TFⅡE(E)的相对位置。转录起始于polⅡ和TFⅡE环绕的区域。;; RNA聚合酶Ⅰ的核心启动子位于-45至+20，上游控制元件位于-180至-107，两部分均有富含GC的区域。转录因子UBF1可结合于两部分富含GC的区域，随后结合SL1四聚体蛋白（作用类似与原核生物的σ因子）。 RNA聚合酶Ⅲ的启动子有3种类型，基因内启动子有两种，一种由boxA-中间元件-boxC组成，转录起始时，TFⅢA(一种锌指蛋白）结合到boxA上，然后 TFⅢC（至少5个亚基组成的复合物）结合，后者促进TFⅢB（含有TBP和另外两种蛋白质，能使RNA聚合酶正确定位）结合，并引导RNA聚合酶结合到起始位点上。 另一种由boxA-间隔区-boxB组成，转录起始时， TFⅢC识别boxB，其结合区包括boxA 和boxB，然后依次引导 TFⅢB和RNA聚合酶的结合。第3类启动子位于转录起点的上游， RNA聚合酶Ⅲ可以结合到其中的TATAbox并起始转录，但其上游的邻近序列元件（proximal sequence element, PSE）和八聚体基序(octamer motif, OCT)会增加转录的效率。;转录的解螺旋方式;(三) 终止子和终止因子 大肠杆菌有两类终止子，不依赖于ρ因子的为简单终止子，能形成发夹区，其中常有一段富含G-C区，终点前有一段寡聚U，可能提供RNA聚合酶脱离模板的信号，同时，寡聚U容易从模板脱落。 依赖于ρ因子的终止子发夹区不含富G-C区，其后也无寡聚U，在细菌中少见，但在噬菌体中广泛存在。ρ因子为六聚体蛋白质，可结合在新合成的RNA链上，借助水解NTP的能量移动，RNA聚合酶遇到终止子时停止移动，ρ因子追上来与其结合，促进RNA聚合酶脱落，并使RNA从模板脱离。 抗终止子可使终止子通读，促进其后的基因转录，λ噬菌体的前早期基因的产物N蛋白是一种抗终止子，可以使终止子通读，使晚早期基因表达，晚早期基因的产物Q蛋白也是一种抗终止子，能使晚期基因得以表达。 真核生物转录的终止了解不多。;识别终止子还需要NusA, NusB, NusE. NusG等因子参与，有关问题有待深入研究。;1. 操纵子的结构和调控 原核生物的不少基因在加入诱导物后mRNA迅速合成，随之酶滞后合成。当去除诱导物时mRNA的合成很快停止，但酶的合成延迟停止。 1961年 Jacob Monod 构建部分二倍体(lacI-/FlacI+) lacs为阻遏蛋白不可诱导性突变，其阻遏蛋白失去诱导物结合位点； lacI-突变的阻遏蛋白不能形成寡聚物； lacI-d突变的阻遏蛋白不能和DNA结合，且呈负互补(反式显性)； Oc操纵基因的突变使结构基因组成型表达。 由此提出操纵子学说。;（1）大肠杆菌乳糖操纵子的结构;大肠杆菌乳糖操纵子的作用方式;乳糖操纵子的降解物阻遏和降解物基因活化蛋白(CAP)的作用; 乳糖操纵子包括三个结构基因（Z、Y、A），三个调控基因（启动基因、操纵基因和CAP蛋白结合位点），以及一个调节基因。调节基因编码阻遏蛋白，阻遏蛋白与操纵基因结合可阻止RNA聚合酶对结构基因的转录。当乳糖存在时，由乳糖转化而成的别乳糖与阻遏蛋白结合，导致阻遏蛋白与操纵基因解离，诱导基因的转录。但是阻遏蛋白脱离操纵基因而解除封闭后，如果没有CAP的作用也不能启动转录。细胞内葡萄糖缺乏、cAMP水平升高时，cAMP与CAP结合形成复合物，并与CAP结合位点结合，可促进RNA聚合酶与启动基因结合并启动转录。所以，乳糖操纵子的诱导作用既需要乳糖的存在又需要葡萄糖的缺乏。当操纵基因突变后，阻遏蛋白即不能与操纵基因结合，结构基因会组成性表达。 ;（2）基因表达的调控方式;（3）araBAD操纵子的正调控和负调控;araBAD操纵子的作用机制;（4）大肠杆菌的色氨酸操纵子;特点: (1) trpR(89’)