[医学]09+脂类的测定.ppt

第九章 食品中脂类的测定 §9-3 食品中脂肪测定－酸水解法 §9-4 食品中脂肪测定 ——氯仿-甲醇提取法（CM法） 思考题 1、脂肪存在的形式，脂肪提取时提取剂的选择 2、索氏提取法的原理及方法 一、原理 用极性的甲醇与非可极性的氯仿作溶液将试样分散于氯仿-甲醇混合液中，于水浴上轻微沸腾，氯仿-甲醇混合液与一定的水分形成提取脂类的有效溶剂，在使试样组织中结合态脂类游离出来的同时与磷脂等极性脂类亲合性增大，从而有效地提取出全部脂类。再经过滤，除去非脂成分，然后回收溶剂，残留脂类用石油醚提取、定量。 二、试剂 1、氯仿-甲醇混合液 按2∶1体积比混合（简称CM溶液）。 2、石油醚。 3、无水硫酸钠 三、仪器 1、具塞三角瓶 2、电热恒温水浴锅 3、提取装置 4、布氏漏斗 5、具塞离心管 6、离心机 四、分析步骤 1、提取 准确称取均匀样品5.00g，置于200mL具塞锥形瓶内(高水分样品可加适量硅藻土使其分散，而干燥样品则要加入2～3mL水使组织膨润)，加60mL氯仿-甲醇混合液，连接提取装置，于65℃水浴中加热，从微沸开始计时提取1h。 2、回收溶剂 提取结束后，取下锥形瓶，用布氏漏斗过滤，滤液收集于另一具塞锥形瓶内，用40mL～50mL氯仿-甲醇混合液分次洗涤原锥形瓶、过滤器及试样残渣，洗液并入滤液中，置于65～70℃水浴中蒸馏回收溶剂，至锥形瓶内物料呈浓稠状 (不能干涸)，冷却。 3、萃取、定量 向以第二锥形瓶中加入25mL石油醚，再加入15g无水硫酸钠，立即加塞振摇1min，将醚层移入具塞离心沉淀管中，以3000r/min的速度离心5min。 用移液管迅速吸取10mL离心管中澄清后的醚层于已恒重的称量瓶内，蒸发除去石油醚后于100℃～105℃的烘箱中干燥30min，置干燥器内冷却后称重。 五、结果计算 式中： X—脂类的含量，g/100g； m—样品质量，g； m2—称量瓶与脂类质量，g； m1—称量瓶质量，g； 2.5—从25mL石油醚中取10mL进行干燥，故乘以系数2.5。 1、过滤时不能使用滤纸，因为磷脂会被吸收到滤纸上。 2、蒸馏回收溶剂时，回收至残留物尚具有一定的流动性，不能完全干涸，否则脂类难以溶解于石油醚中，从而致使结果偏低。 3、在进行萃取时，无水硫酸钠必须在石油醚之后加入，以免影响石油醚对脂肪的溶解。 六、说明 §9-5 乳脂的测定 乳是多种物质的混合物，它不是简单的分散体系，而是具胶体特性的多级分散体系，乳蛋白质中主要的酪蛋白，以酪蛋白酸钙—磷酸钙复合胶体构成乳浆胶体溶液。乳脂肪以脂肪球状态，分散于乳浆中形成乳浊液。脂肪球为一层脂肪膜所包围，从而保持了乳浊液的稳定性。脂肪球膜是由蛋白质、磷脂等复杂化合物有层次地定向排列于脂肪球与乳浆界面上形成了由脂相到水相的过渡。所以在乳脂类的测定中，用有机溶剂不能直接提取，而必须先行破坏胶体状态，进而破坏脂肪球膜，使脂肪游离出来，再用有机溶剂进行提取、定量。 一、哥特里-罗紫法 （GB/T 5009.46-2003 乳与乳制品卫生标准的分析方法） 哥特里-罗紫法是用碱处理使酪蛋白钙盐溶解，并破坏其胶体特性，降低其对脂肪球的吸附，再利用乙醇破坏脂肪与非脂成分的结合，使脂肪游离出来，再行提取。 也称碱性乙醚提取法，是ISO和FAO/WHO等采用，为乳及乳制品的国际标准方法。 （一）原理 利用氨-乙醇溶液，破坏乳的胶体性状及脂肪球膜，使非脂成分溶解于氨-乙醇溶液中而脂肪游离出来，再用乙醚-石油醚提出脂肪，蒸馏去除溶剂后，残留物即为乳脂。 （二）适用范围 它适用于各种液状乳（生乳、加工乳、部分脱脂乳、脱脂乳等）、各种炼乳、奶粉、奶油及冰淇淋。除乳制品外，也适用于豆乳或加水呈乳状的食品。 （三）试剂 1、氨水 2、乙醇 3、乙醚 4、石油醚：沸程30℃～60℃ （四）仪器 抽脂瓶：内径2.0cm～2.5cm，容积100mL。 （五）分析步骤 准确称取试样 (如乳粉试样) 1g～1.2g，或吸取10.0mL鲜乳试样置于抽脂瓶中，加入1.25mL浓氨水，充分混匀，置60℃水浴中加热5min，再振摇2min，加入10mL乙醇，充分摇匀，于冷水中冷却后，加入25mL乙醚，塞好塞子振摇0.5min，加入25mL石油醚，再振摇0.5min，静置30min，待上层液澄清时，读取醚层体积（V0）。 放出醚层至一已恒重的烧瓶中，记录体积（V1），蒸馏回收乙醚，置烧瓶于98℃～100℃干燥1h后称量，再置98℃～100℃干燥0.5h后称量，直至前后两次质量相差不超过1.0mg。 （六）结果计算 式中：