[医学]生物制药学——第十三章 生化药物制造工艺.ppt

3.衍生氨基酸：活性基团经化学修饰 谷氨酰胺、5-羟色胺酸、硫酸甘氨酸、磷葡精氨酸等 4.必需氨基酸和非必需氨基酸： 8种必需AA（人）: 亮、异亮、赖、苯丙、甲硫、苏、色、缬。 半必需氨基酸：精氨酸、组氨酸 非必需氨基酸：能自身合成 氨基酸的营养价值及其与疾病的关系 治疗消化道疾病的氨基酸及其衍生物 治疗肝病的氨基酸及其衍生物 治疗脑及神经系统疾病的氨基酸及衍生物 用于肿瘤治疗的氨基酸及其衍生物 其他氨基酸类药物的临床应用 二、氨基酸类药物的制造方法 （一）蛋白质水解法 L-胱氨酸、L-半胱氨酸 （二）发酵法 苏、异亮、缬、精、组、脯、鸟、瓜、赖、亮 （三）酶转化法 丙、天冬、色 （四）化学合成法 甘、蛋、丙、丝 ?碱水解法： 方法： 6 mol/L 氢氧化钠或4 mol/L氢氧化钡，100 ℃水解6 h。 产物：多种氨基酸混合物。 优点：水解迅速而彻底，色氨酸不被破坏； 缺点：含羟基或巯基的氨基酸全被破坏，且产生消旋，工业上多不采用。 ?酶水解法： 方法：在一定pH和温度条件下，经蛋白水解酶作用 产物：氨基酸和小肽 优点：反应条件温和，无需特殊设备；氨基酸不被破坏，无消旋作用； 缺点：水解不彻底，产物中除氨基酸外，尚含有多肽。工业上主要用于生产蛋白及蛋白胨。 ?溶解度法：溶解度的差异 ?特殊试剂法： L-Cys2的特点：pI 5.05，不溶于乙醇、乙醚和丙酮，可溶于无机酸或无机碱。 赖氨酸的性质： pI 10.56，不溶于乙醇、乙醚，可易溶于水。 作用与用途： L-Lys为必需氨基酸，也是复方氨基酸输液的重要成份之一。近来有关研究发现赖氨酸对人的脑部神经中枢细胞有很好的修复作用，还可以治疗癫痫病、老年性痴呆、脑出血等。 发酵法的工艺： ①菌种：黄色短杆菌、谷氨酸棒杆菌、乳糖发酵短杆菌、诺卡杆菌 ②碳源：淀粉水解糖、葡萄糖、醋酸、乙醇等。 ③氮源：硫酸铵、尿素等。 ④工艺流程 ⑤工艺控制要点 工艺控制要点 ①菌种的培养： 大肠杆菌AS1.881（含天冬氨酸酶） 德阿昆哈假单胞68变异株（含L-天冬氨酸-β-脱羧酶） ②细胞固定： 凝胶包埋，加戊二醛交联 ③生物反应堆的制备（分Ⅰ和Ⅱ） ④转化反应（温度、pH值、催化剂） 两个反应堆的温度：37℃ 两个反应堆的pH值：反应堆Ⅰ：8.5；反应堆Ⅱ：6.0 1、制备中为什么要调pH值？ 2、在转化反应Ⅱ中为什么要加磷酸吡哆醛？ ⑤产品纯化与精制 结晶与重结晶 多肽类生化药物是以多肽激素和多肽细胞生长因子为主的一大类内源性活性成分。 1953年，人工合成了第一个有生物活性的多肽—催产素。 20世纪五十年代---脑垂体分泌的多肽激素 60年代---控制脑垂体激素分泌的各种多肽激素 70年代---神经肽，胃肠道激素。 蛋白质生化药物包括蛋白质类激素、蛋白质细胞生长调节因子、血浆蛋白质类、黏蛋白、胶原蛋白、蛋白酶抑制剂等。 作用方式：从对机体各系统和细胞生长的调节，扩展到被动免疫、替代疗法和抗凝血等。 细胞生长调节因子---在体内和体外对效应细胞的生长、增殖和分化起调控作用的一类物质。 许多生长因子在靶细胞上有特异性受体，仅微量就有较强的生理活性。 生物技术的应用 基因工程技术制造------胰岛素、干扰素、白介素、生长素、EPO等实现了工业化，发展方向为转基因动植物。 研究活性多肽结构与功能的关系及活性多肽之间结构的异同与其活性的关系，将有助于设计和研制新的活性多肽药物。 对蛋白质类药物进行结构修饰。 三、重要的多肽与蛋白类药物的制备 1、胸腺激素（Thymus hormones） 胸腺是一个激素分泌器官，对免疫功能有多方面的影响。胸腺依赖性的淋巴细胞群——T细胞直接参与有关免疫反应。 现已知某些免疫缺陷病、自身免疫性疾病、恶性肿瘤以及老年性退化性病变等皆与胸腺功能的减退及血中胸腺激素水平的降低有关。 ①结构和性质 胸腺素组分5是由在80℃热稳定的40~50种多肽组成的混合物，分子量在1000～15000之间，等电点在3.5～9.5之间。 ③检验方法： 活力测定：E-玫瑰花结升高百分数不得低于10％；分子量15000以下。 ④ 作用与用途：为免疫调节剂。 降钙素是一种调节血钙浓度的多肽激素， 由甲状腺内的滤泡旁细胞（C细胞）分泌。 抑制破骨细胞活力，阻止钙从骨中释放，降低血钙。 临床用于：骨质疏松症、