常用工具酶培训讲解.pptVIP

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3 常用工具酶;第一节 限制性核酸内切酶;1962年,W.Arber提出一个假设来解释上述现象,就是细菌的限制(限制酶)-修饰(甲基化酶)系统。 当λ(k)噬菌体侵染E.coliB时,由于其DNA中有EcoB核酸酶特异识别的碱基序列,被降解掉。而E.coliB的DNA中虽然也存在这种特异序列,但可在EcoB甲基化酶的作用下,催化S-腺苷甲硫氨酸(SAM)将甲基转移给限制酶识别序列的特定碱基,使之甲基化。 EcoB核酸酶不能识别已甲基化的序列。 ;;;;;;;;;;;;;;第二节 DNA连接酶;;;;;;;;;;一、大肠杆菌DNA聚合酶I(DNA pol I) 基本特性:Kornberg A. 1956年首先从大肠杆菌细胞中分离出来,它是一种多功能性的酶,包括3种不同的酶活力: 5′- 3′聚合酶活性:以双链DNA为模板,催化单核苷酸结合到引物的3′末端,并不断延伸。 5′- 3′外切酶活性:将双链DNA中游离的5′末端逐个切去。 3′- 5′外切酶活性:将游离的双链或单链DNA的3′端降解。不过对于双链的降解可被5′-3′的多聚活性所抑制。;;;;;;;第四节 核酸酶;;第五节 修饰酶;;;

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