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内毒素定量检测 Bacteria Endotoxin Test 1892年,科学家Richard在研究霍乱弧菌的时候,发现革兰阴性菌细胞壁外膜中有一种不溶性成分,它能够引起人体发热、休克、器官损害等病理表现，因其毒性效应和性质与外毒素有显著差异，就用内毒素这一术语来描述该物质。随后多年对革兰阴性菌细胞壁外膜的超微结构技术和生物分析技术，证实内毒素是磷脂双分子层结构。 内毒素的组成 内毒素的定义和危害 内毒素的理化性质 人体内毒素的来源 仪器试剂的介绍及实验原理 仪器特点 鲎 20世纪六十年代，人们发现一种古老的海洋生物，被称为“海洋活化石”的鲎，它的血液与内毒素接触后会发生特异性的凝集反应，人们经过大量研究和实验从它的血液中提取出了用来检测内毒素的“鲎试剂”。 鲎试剂的发明 1968年1月Jack Levin和 Frederik B.Bang教授在美国马塞诸塞州Wools Hole海洋生物实验室成功分离提取鲎血细胞并研制成能够检测细菌内毒素的鲎试剂，开辟了人类认识和检测内毒素的新纪元！ 试剂盒特点 鲎试剂是唯一能够检测内毒素水平的生物试剂 内毒素的单位—EU/ml 实验原理 通过鲎试剂与内毒素溶液混合会发生凝集反应产生浊度变化，通过浓度—时间反应曲线，得出待测样品的内毒素浓度； 实验原理 实验原理 鲎试剂与内毒素反应是特异性的“S”曲线，取光密度值为0.02点时作为反应终点时间，内毒素的浓度与反应时间成反比 BET检测标本范围 检测内毒素的方法 定性检测 几种检测方法的比较 凝胶法检测的特点 “限量”检测，是一种传统经典的检测方法； 凝胶法是以试管内反应物凝胶牢固程度为判断标准，易受人为因素影响； 限量检查的最低检测限仅为0.035EU/ml，因供试品稀释倍数所限，容易被供试品干扰，误差大。因此，凝胶法不适合在临床用于体液的细菌内毒素检查； 动态浊度法检测的特点 体液前处理流程 发热原因的快速辅助诊断（ 1小时） 内毒素定量检测的临床意义 怎样早期判断Gˉ的感染情况 （Gˉ）重症疾患的早期诊断 G￣脓毒症合并内毒素血症 帮助临床医生快速筛选合理抗生素 循环血中内毒素值越低，炎性介质释放得越少，器官损害越弱，病情越轻；给予治疗的同时复查内毒素，就能判断临床治疗效果的好坏。 肠源性内毒素血症 内毒素检测与微生物培养的关系 内毒素与血培养的结果比较 内毒素与痰培养的结果比较 BET和PCT的区别 分段区间的解释 BET测得值的影响因素有那些 内毒素血症的预防和治疗 zzzzzzzzz zzzzzzzzz zzzzzzzzz zzzzzzzzz zzzzzzzzz 。 各类致病因素 处于应激状态 肠道屏障功能减弱 消化道通透性增强 内毒素进入肠道周围淋巴结 zzzzzzzzz zzzzzzzzz zzzzzzzzz 经淋巴管进入肝脏 超出肝脏能够解毒的范围 zzzzzzzzz 体循环 zzzzzzzzz 内毒素血症 发热、炎症 应激：应激（stress）是指机体在受到各种强烈因素（即应激原)剌激时所出现的以交感神经兴奋和垂体-肾上腺皮质分泌增多为主的一系列神经内分泌反应以及由此而引起的各种机能和代谢的改变。 精确确定 菌种确定 确定菌种 √ √ 指导用药 3～7天，慢 ≯1h 快 检测速度 ＜20% ＞80% 阳性率 × √ 重疾早期预警 × √ 评估病情轻重 微生物培养 内毒素检测 鲍曼不动杆菌 0.5904 ICU 鲍曼不动杆菌 0.1408 ICU 大肠埃希菌 13.4727 肾内科 大肠埃希菌 2.1 肝移植科 大肠埃希菌 16.8792 肝移植科 大肠埃希菌 0.2136 ICU 大肠埃希菌 0.4808 脑外科 血培养结果 内毒素结果(EU/ml) 科室 内毒素超标,血培养阳性 阴沟肠杆菌 10.204 肾移植科 大肠埃希菌 8.0672 ICU 铜绿假单胞菌鲍曼不动杆菌 11.2776 脑外科 肺炎克雷伯菌铜绿假单胞菌 1.8264 肾内科 鲍曼不动杆菌 2.79 肝移植科 肺炎克雷伯菌 3.2064 脑外科 肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌 3.0096 脑外科 痰培养结果 内毒素结果(EU/ml) 科室 PCT本身无致病作用，而LPS能直接导致人体发热及产生炎症反应 PCT也是在以LPS为首的炎症因子作用下刺激机体靶细胞产生 PCT仅能判断是否是细菌感染