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（二）血药浓度测定方法的建立和验证 由于人体内药物浓度低且干扰因素较多，在进行治疗药物监测时首先必须建立一个测定血浆或其它生物样品中药物浓度的方法，并经过方法验证后才能进行试验。 1．特异性 （specificity） 即专一性，是指所建立的方法必须证明所测定的物质是原形药物或特定的活性代谢物，内源性物质和相应的代谢物不得干扰样品的分析。 常用方法： 紫外光谱法、色谱法、质谱法等 青藤碱HPLC图 A 空白血清 B 青藤碱对照品 C 提取后样品 1 青藤碱 2．线性范围和标准曲线 线性（linearity）是指所测定物质与响应间的相关性。这种相关性用回归分析方法（如用加权最小二乘法）所得的回归方程来评价。 注意点*** 1，相关系数应0.95 2，应有20倍线性范围浓度 3，至少有5个浓度点 4，应覆盖全部待测浓度，不允许将线性范围外推求算未知样品的浓度。 标准曲线高低浓度范围为线性范围，在线性范围内的浓度测定结果应能达到试验要求的精密度和准确度，并应覆盖全部待测浓度，不允许将线性范围外推求算未知样品的浓度。 3．精密度 精密度（precision）又称之为重复性（reproducibility），测得的结果应能够重复。测定方法的精密度用日内、日间相对标准差（RSD)表示。 测定精密度的注意点 1，至少选择3个浓度，每个浓度至少测5个样品 CV％＝S/X x100 2, 日内变异系数5% 日间变异系数10% 是指测得的生物样品的浓度与真实浓度的符合程度，一个好的测定方法所得结果应与真实值一致或十分接近。 4．准确度（accuracy） 准确度可用偏差（bias）或回收率(recovery)表示。 偏差即为测定结果与真实值之间的差值，差值越小说明与真实值越吻合，即方法越可靠。偏差一般应小于15%。 回收率是将药物纯品加到生物样品中，以测得的含量与加入纯品含量相比求出回收率，同样在标准曲线范围内选择低、中、高三个浓度，每个浓度重复5次，一般应高于60%。 5. 灵敏度 灵敏度用最低检测浓度或定量限（limit of quantitation, LOQ）表示， 定量限是标准曲线上最低浓度点，表示测定样品中符合准确度和精密度要求的最低药物浓度，一般以ng/ml（?g/L）或?g/ml（mg/L）表示。 多数药物的有效血浓度在ng或?g/ml水平，测定方法的最低定量限必须在这一水平内。 对含药生物样品在室温、冰冻和冻融条件下,在一定期间内进行稳定性考查。 6. 样品稳定性 （2）在每批样品测定时应同时制备低、中、高3份质控（标准浓度）管或制备标准曲线。 7. 方法学质控 在测定血浆或其它生物样品中药物浓度时应进行质量控制： （1）分析方法基本建立后，应由项目负责人提出未知浓度样品管（5～10个），用单盲法具体方法研究者盲）考查其方法的可靠法。 （三）采血时间与方法 血浆药物浓度测定值是指导设计合理给药方案的重要数据。恰当时间与合适方法采取血样是确保血药浓度真实性的重要保证。 1.多次给药时应在达稳态浓度时采血 一般需4～5个半衰期。 2，单次给药时最后采血点应超过5个半衰期 3，临床PK实验时，采血点一般8-10个 4，准确记录给药时间和采血时间 采血时注意事项 5.应考虑对峰谷血药浓度的测定 对于半衰期短的药物如庆大霉素（t1/2=2.5h）等，最好知道峰谷浓度。在给药后不久（例如静脉注射后15分钟）采血一次，以测峰浓度。下次给药前再采血一次，以测谷浓度。以考证血药浓度波动是否在有效无毒范围之内。 五、血药浓度测定方法*** 1，光谱学方法（UV法） 2，色谱学方法（HPLC、GC） 3，质谱学方法 质谱－色谱联用法 4，免疫学方法 5，微生物法 （一）色谱法 色谱法主要包括 气相色谱法（gas chromatography,GC） 高效液相色谱法（high performance liquid chromatography, HPLC） HPLC流程图 HPLC的优点 1，分离效能高、适用范围广 几乎可以测定常规监测的所有药物，它不仅能测定原形药，而且还能测定代谢物。 2，分析速度快 3，灵敏度高 检测极限一般为1-0.01ng 4,特异性高 如用手性HPLC柱，可分离手性药物对映体 5，高度自动化 自动进样器 6，样品易回收 青藤碱HPLC图 A 空白血清 B 青藤碱对照品 C 提取后样品 1 青藤碱 第18章 治疗药物监测 Therapeutic Drug Mon