辣椒制品中苏丹红Ⅰ的快速检测胶体金免疫层析法征求意见稿.DOCVIP

附件 辣椒制品中苏丹红I的快速检测 胶体金免疫层析法 （征求意见稿） 范围 本方法规定了辣椒制品中苏丹红I的胶体金免疫层析快速检测方法。 本方法适用辣椒酱、辣椒油、辣椒粉中苏丹红I的快速测定。 原理 本方法采用竞争抑制免疫层析原理。样品中的苏丹红I与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了抗体和检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化，通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中苏丹红I进行定性判定。 试剂和材料 除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。 试剂 乙腈。 无水硫酸镁。 正己烷。 二氯甲烷。 氢氧化钠。 氢氧化钠溶液（2mol/L）：称取氢氧化钠（3.1.5）8g，用水溶解并稀释至100mL。 无水乙醇。 复溶液：将无水乙醇（3.1.7）与水按照体积比25:75混匀。 参考物质 苏丹红I参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量见表1，纯度≥95%。 表1 苏丹红I参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子量 中文名称 英文名称 CAS登录号 分子式 相对分子量 苏丹红I Sudan I 842-07-9 C16H12N2O 248.28 注：或等同可溯源物质。 标准溶液的配制 苏丹红I标准储备液（1mg/mL）：精密称取苏丹红I参考物质（3.2）适量，置于10mL容量瓶中，加入适量乙腈（3.1.1）超声溶解后，用乙腈稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1mg/mL的苏丹红Ⅰ标准储备液。-20 ℃避光保存，有效期6个月。 苏丹红I标准中间液（1μg/mL）：精密量取苏丹红I标准储备液（1mg/mL）（3.3.1）100μL，置于100mL容量瓶中，用乙腈（3.1.1）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1μg/mL的苏丹红I标准中间液。 材料 固相萃取柱：CNW Poly-sery MIP-SDR固相萃取柱（200mg/3mL），或相当者。 苏丹红I胶体金免疫层析试剂盒，适用基质为辣椒酱、辣椒油、辣椒粉。 金标微孔。 试纸条或检测卡。 仪器和设备 移液器：200μL、1mL和5mL。 涡旋混合器。 离心机：转速≥4000r/min。 电子天平：感量为0.01g。 氮吹仪。 水浴锅。 环境条件：温度15℃～35℃，湿度≤80%。 分析步骤 试样制备 取适量样品，液体样品或半固体样品充分混匀，固体样品充分粉碎混匀。 试样的提取 5.2.1 辣椒酱 称取辣椒酱2g（精确至0.01g）于15mL离心管中，加入0.5g无水硫酸镁（3.1.2）和5mL正己烷（3.1.3）提取液，涡旋振荡1min后，4000r/min离心5min。将上清液全部加入到固相萃取柱（3.4.1）中，流出液弃去。再加入6mL正己烷淋洗固相萃取柱，流出液弃去。用2mL二氯甲烷（3.1.4）洗脱固相萃取柱，收集洗脱液吹干。精密加入400μL复溶液（3.1.8），涡旋混合1min，作为待测液，立即测定。 5.2.2 辣椒油 称取辣椒油5g（精确至0.01g）于15mL离心管中，加入8mL正己烷（3.1.3）进行提取，涡旋振荡1min后，将上清液全部加入到固相萃取柱中，流出液弃去。再加入6mL正己烷淋洗固相萃取柱，流出液弃去。用2mL二氯甲烷（3.1.4）洗脱固相萃取柱，收集洗脱液吹干。精密加入400μL复溶液（3.1.8），涡旋混合1min，作为待测液，立即测定。 5.2.3 辣椒粉 称取辣椒粉3g（精确至0.01g）于50mL离心管中，加入8mL乙腈（3.1.1）提取，涡旋振荡1min后，6000r/min离心5min。转移上清液于10mL离心管中，吹干后加入2mL氢氧化钠溶液（3.1.6），涡旋混匀30s后置于80℃水浴皂化5min。再加入2mL正己烷（3.1.3），涡旋萃取30s后，6000r/min离心5min，转移上清液于新的10mL离心管中，加入无水硫酸镁（3.1.2）0.5g，涡旋振荡30s后，4000r/min离心5min，转移上清液于10mL离心管中吹干。精密加入400μL复溶液（3.1.8），涡旋混合1min，作为待测液，立即测定。 测定步骤 5.3.1 试纸条与金标微孔测定步骤 吸取200μL待测液于金标微孔（3.4.2.1）中，抽吸5～10次使混合均匀，室温温育3～5min，将试纸条（3.4.2.2）吸水海绵端垂直向下插入金标微孔中，温育5～8min，从微孔中取出试纸条，进行结果判定。 检测卡与金标微孔测定步骤 吸取200μL待测液于金标微孔（3.4.2.1）中，抽吸5～10次使混合均匀，室温温育3～5min，将金标微孔中全部溶液滴加到检测卡（3.4.2.2）上的加样孔中，温育5～8min，进行结果判定。 质控试验 每批样品应同时进行空白试验和加标质控试验。