茶叶中提取咖啡因和薄层色谱精选.ppt

一、实验目的 1、了解从茶叶中提取咖啡因和儿茶素的基本 原理和方法。 2、掌握索氏提取器液-固萃取重结晶，常压蒸 馏，浓缩，减压过滤，升华等基本操作。 3、学习并掌握薄层色谱法和操作技术，进行 定性分析的原理。 仪器： 索氏提取器，烧杯(250mL)，量筒(100mL)，研钵，分液 漏斗(125mL)，圆底烧瓶(250mL)，直形水冷凝管，蒸馏头，接 受管，电热套，恒温水浴箱，锥形瓶(100mL)，蒸发皿，点滴 板，硅胶G薄层层析板，层析槽，电吹风，喷瓶，漏斗，玻棒, 酒精灯，石棉网，铁夹铁圈，铅笔和小尺子(自备)。 试剂： 干茶叶，碳酸钠，氯仿，95％乙醇， 酸性碘-碘化钾溶液，乙酸乙酯。 材料： 毛细管，沸石，滤纸，脱脂棉 。 四、实验步骤 2、升华提纯 四分法取出1/4粗产品，其余置蒸发皿中，将口径合适的玻璃漏斗（颈部塞一小团棉花）罩在隔以刺有许多小孔滤纸的蒸发皿上，用酒精灯小心加热升华。当滤纸上出现许多白色毛状结晶时，停止加热，让其自然冷却至100℃左右。 小心取下漏斗，揭开滤纸，用刮刀将纸上和器皿周围的咖啡因刮下。残渣经拌和后用较大的火再加热片刻，使升华完全。合并两次收集的咖啡因，称重，计算产率。 3、薄层色谱 用氯仿溶解质量相近的咖啡因粗产品和纯化产物，用毛细管点样于已活化的硅胶G薄层层析板上的样品点上，点样次数依样品溶液浓度而定，一般为2～5次，第一次点样干后才能第二次点样，点样后的斑点扩散直径≤2mm。 预先将氯仿:甲醇=9︰1的混合溶液约15mL放入层析缸中并盖上盖，将点好试样的薄层板放入层析槽展开，当展开剂上升到薄层板的前沿（离顶端1～2cm时）取出薄层板，立即用铅笔轻轻划出前沿位置后，用电吹风将薄层板吹干除去展开剂，喷上显色剂显示斑点位置，计算各组分的Rf值。 五、实验关键 1、充分提取茶叶中咖啡因（滤纸筒大小，高低 应合适，茶叶充分研细不能漏出），索氏提取回流时， 控制回流速度1~2滴/秒，回流虹吸五次以上。 2、粗产品用称量纸密闭保存。 3、样品转移至蒸发皿，加2粒沸石，加3gCaO，用 灯焰隔石棉网尽量炒干，除去全部水分，否则升华时会 有烟雾。 4、咖啡因升华要充分，升华温度不可太高，升华 到残渣呈棕色时为止。 5、样品点样量应适宜，直径控制在2mm内，避免 斑点混合或无色斑出现，样品斑点不能浸入展开剂中。 1、提取和常压蒸馏时要加入沸石，防止暴沸；先通入冷 却水，再加热。 2、滤纸筒直径略小于抽提筒，其高度要高于虹吸管，但 低于蒸气上升管。 3、升华装置上盖的滤纸直径应大于蒸发皿，所用的玻璃 漏斗直径要与蒸发皿直径相当。 4、滤纸上的小孔要大些，分布均匀在玻璃漏斗盖住的范 围内,使用时孔刺向上；玻璃漏斗颈口处要塞一小团脱酯棉。 5、常压蒸馏时，蒸馏速度不能过快；蒸馏烧瓶内残留的 液体要适量。 6、应在通风柜中蒸发浓缩，不断搅拌蒸发皿中的液体。 7、小火控制好升华温度，一次升华的时间要长些，使 咖啡因充分升华。 8、层析板应予以活化后使用。在层析板上用铅笔（不 能园珠笔）轻画点样线和点样原点，不能使该处的固定相断 开，否则会影响展开剂均匀移动。 9、薄层板上点样时，需使用平口毛细管与薄层轻轻接 触点样原点。 10、展开剂需在使用前配制，并在展开前放入层析缸 中，使层析缸内空间被展开剂饱和后（避免边缘效应）再将 点好试样的薄层板放到层析缸中展开。层析板上的点样原点 只能在展开剂液面上，展开剂液面与样品原点线间的距离基 本一致。 11、展开过程中不能晃动层析缸，展开结束时应立即画 出展开剂前沿的位置，并用吹风机将薄层板上的展开剂吹 干，避免板上的展开剂向多个方向扩散。 12、显色剂要成雾状均匀喷洒，液滴不能太大；显色 后，立即用铅笔轻画出斑点的区域。 六、思考题 1、使用索氏提取器进行提取操作时应注意那些事项？ 2、咖啡因提取液的乙醇浓缩液在蒸气浴干燥前，为什么 要加入CaO？ 3、升华操作时应注意什么？ 4、薄层板上点样，为什么样品斑点的直径不能太大？点 样时，样品量过多或过少对分离的效果有什么影响？第一次点 样时溶剂还未挥发即第二次点样，对薄层分离又有何