生殖免疫学检查方法.ppt

生殖免疫学检查方法 中山大学第二附属医院妇产科 刘玉昆 复发性自然流产病因复杂，包括解剖、内分泌、遗传、感染等因素，但仍有50%以上的患者病因不明 大部分原因不明的复发性自然流产患者与免疫因素有关，包括自身免疫和同种免疫 常用的生殖免疫学检查方法 基本原理 在复发性自然流产诊治中的价值和地位 抗磷脂抗体 抗磷脂抗体属一类针对各种带负电荷磷脂的自身抗体，临床上常与复发性动静脉血栓形成、复发性自然流产、血小板减少症等密切相关 磷脂抗体的靶抗原实际上是磷脂/磷脂结合蛋白复合物 能形成此复合物的磷脂有：磷脂酰丝氨酸、心磷脂、磷脂酰甘油、磷脂酰肌醇、磷脂酰酸、磷脂酰胆碱等，因此形成相应的多种磷脂抗体 抗心磷脂抗体和狼疮抗凝因子 曾经有过自然流产史并且ACA高水平者，RSA发生率达70%，曾经自然流产≥3次，ACA阳性者，再次自然流产机率可达90% RSA患者APA阳性发生率15-20%，而无自然流产者阳性率为2-5%，且其中ACA阳性者大部分为低度阳性 Harris等调查1000名非选择性产科病人，结果2%患者ACA IgG阳性，4% IgM阳性，其中80%是弱阳性，只有0.2%的IgG和0.7%的IgM为中、重度阳性 狼疮抗凝因子（LA） 1952年， Conley和 Hartmam发现两位因凝血酶原时间和全血凝块时间延长而有出血性疾病的SLE患者中存在一种“抗凝物”，1972年正式命名其为LA 是抗磷脂抗体的一种 LA的实验室检查 在体外实验中，LA能通过与磷脂表面结合而阻断钙依赖性的凝血酶原酶复合物的形成，从而使APTT延长。 筛查实验： 活化部分凝血活酶时间（APTT） 进一步确证实验 在患者血浆中加入正常血浆， APTT延长不能得到纠正 在血浆中加入过量磷脂，APTT可以得到纠正 抗心磷脂抗体（ACA） 抗心磷脂抗体的检测方法目前最常用的为酶联免疫吸附法（ELISA） 原理：酶标板经牛心磷脂包被，以含20%成年牛血清的PBS 封板，加入稀释的待测血清，孵育1小时，洗涤，加HPH-抗人IgG，洗涤后加底物，于酶标仪上判断结果 注意问题 感染性疾病（如梅毒、疟疾、甲肝、丙肝、结核、爱滋病、巨细胞病毒、B19微小病毒等）可使 ACA呈阳性反应 ACA检验结果应以阴性、弱阳性、中度阳性、强阳性表示，少部分正常人呈弱阳性，以中度阳性、强阳性的临床意义最大 ACA的检测结果受靶抗原浓度、酶标板的敏感度、合适的缓冲液等影响，因此各实验室的检验结果可能有一定差异 ACA作用的靶抗原实际上是磷脂与β2糖蛋白的抗原复合物，因此在磷脂抗体ELISA检测系统中，必须提供足够量与浓度稳定的β2糖蛋白。 ACA和LA有密切相关性，但二者不同，因此二者都应检测 抗磷脂抗体与不孕 抗磷脂抗体能否引起不孕？ 反复IVF失败者是否需检测抗磷脂抗体？ 阳性者是否需治疗？ 报道不一致 系统综述表明： 抗磷脂抗体引起不孕的证据不足 不支持对IVF失败者常规进行抗磷脂抗体的 检测 对抗磷脂抗体阳性的不孕患者是否需 要干预还有争议 抗核抗体（ANA） ANA是指针对细胞核内成分所产生的抗体 细胞核内成分复杂，有核糖核酸、脱氧核糖核酸、酶、蛋白等，抗核抗体是指抗细胞核内的RNA、DNA，各种酶和蛋白质等的总称 包括抗DNA抗体、抗组蛋白抗体、抗非组蛋白抗体、抗核仁抗体 临床上常用的测定方法为间接免疫荧光检测 ANA并不象ACA一样与RSA与密切关系 尽管ANA在RSA中似乎更常见，但他们的存在并不能预测妊娠的结局 Fausett总结了目前的研究资料，认为： ANA阳性可能只是提示机体其它自身抗体（特别是APL）的存在 例如有三项研究发现在RSA患者中，ANA阳性者其APL的阳性率分别为17%、71%、100%。 没有合理、有效的治疗手段 不支持对不孕患者常规进行ANA的检测 抗精抗体（ASA） 抗精抗体是机体产生的针对精子抗原的抗体 由于机械屏障的破坏、炎症等原因，男女双方的机体内可产生抗精抗体 男方还是女方 产生的部位 何种检查方法 抗精抗体检测技术 1. 以精子膜提取物抗原检测体液标本精子抗体的方法：如酶联免疫吸附法 敏感、高效、检测样本用量少，主要用于检测血清中的抗精抗体 提取过程对蛋白分子的损伤，膜内侧的成分等可能与血清中存在的自身抗体发生结合 以酶联免疫试验检测血清、宫颈黏液的抗精子抗体，不明原因不育夫妇及抗体阳性妇女间体外受精和妊娠率，并无明显差别 以精子膜提取物作为抗原的检测技术仍有很大缺陷 2. 以活动精子检测体液标本中精子抗体的方法：如凝集试验、精子制动试验等 以活精子作为抗原载体，有助于排除精子内