大鼠微卫星DNA检测法-中国试验动物学会.PDFVIP

ICS 65.020.30 B 44 中国实验动物学会团体标准 T/CALAS x-201x 实验动物 小鼠、大鼠微卫星 DNA 检测法 Laboratory animals- Methods for Microsateltlie markers of laboratory mice rats 201x-xx-xx 发布 201x-xx-xx 实施 中国实验动物学会 发布 0 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009 给出的规则编写。 本标准附录为规范性附录（或资料性附录）。 本标准由中国实验动物学会归口。 本标准由全国实验动物标准化技术委员会（SAC/TC281 ）技术审查。 本标准由中国实验动物学会实验动物标准化专业委员会提出并组织起草。 本标准起草单位：中国食品药品检定研究院。 本标准主要起草人：岳秉飞、王洪，陈振文、魏杰。 本标准于201x 年xx 月首次发布。 0 引言 DNA 多态性是实验动物遗传检测的重要手段，在动物的基因组中都发现了许多简 单重复序列，因为其重复单位比小卫星 DNA 短，故称为微卫星 DNA （microsatellite）。微卫星DNA 重复单位以二核苷酸重复单位AC ／TG 最为多见， 重复单位的重复次数是可变的，一般为10-2O 次左右，这就构成了微卫星DNA 多态性 的基础。微卫星DNA 两端的侧翼序列是较保守的单拷贝序列，因此，微卫星DNA 能被 特异地定位在染色体的特定位置上。根据研究结果，制定出小鼠、大鼠遗传检测 法，用于遗传质量控制、遗传组成分析和品系鉴别。 1 实验动物 小鼠、大鼠微卫星DNA 检测法 1 范围 本标准规定了实验动物小鼠、大鼠的DNA 多态性检测方法。 本标准适用于实验动物小鼠、大鼠遗传组成分析、品系鉴别和质量控制。 2 规范性引用文件 下列文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注明日期的引用文件，仅注日期的版本 适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 14923 实验动物 哺乳类实验动物的遗传质量控制 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本规程。 3.1 微卫星 DNA microsatellite DNA 是指动物基因组中由1-6bp 碱基组成一个重复单位，再首尾相连而形成的串联重复序 列，简称STR。微卫星DNA 重复单位以二核苷酸重复单位AC ／TG 最为多见，重复单位的重 复次数是可变的，一般为10-2O 次左右，形成了微卫星DNA 的多态性。 4 操作程序 4.1 试剂 DNA 提取试剂盒，PCR 反应试剂盒，琼脂糖。 4.2 实验设备和器材 4.2.1 仪器设备：电泳仪，离心机，PCR 仪。 4.2.2 器材：剪刀、镊子、移液器、离心管、PCR 管、滤纸。 4.3 微卫星位点的选择 4.3.1 近交系小鼠 在表1 中选择20 个微卫星位点，原则上需覆盖小鼠的20 条染色体。 1 表1： 30 个实验小鼠微卫星位点的扩增条件和染色体分布 位点 引物序列(5’-3’) 染色体 镁离子浓度 退火温度 Locus Primer sequence(5’-3’) Chromoso MgCl (mmol/ Temp( ℃) 2